發(fā)布時間：2022-01-27 03:39

　　目的應用規(guī)律間隔成簇短回文重復序列及其相關核酸酶9系統(tǒng)（CRISPR/Cas9）體外實驗研究修正威爾森氏癥（WD）基因。方法選用來源于DL近交系小鼠的Toxic milk小鼠（購自美國Jackson Laboratory公司）作WD模型,設計3個CRISPR來源的RNA （crRNA）-crRNA001/002/003,應用CRISPR/Cas9核糖核蛋白復合物（RNP）方法轉(zhuǎn)染W(wǎng)D肝細胞,48 h后提取基因組DNA,聚合酶鏈反應（PCR）后測序檢測基因編輯效率,篩選出效率最高者crRNA001,并設計相應的單鏈寡核苷酸（ssODN）修復模板;用crRNA001和ssODN共轉(zhuǎn)染肝細胞,模板特異性引物行PCR,驗證ssODN摻入。組間比較采用Student’St檢驗。結(jié)果 Sanger測序結(jié)果顯示,crRNA001的編輯效率為（57.8±5.1）%。用ssODN共轉(zhuǎn)染細胞后,模板特異性引物行PCR,能擴增出修正后的銅離子轉(zhuǎn)運ATP酶β肽（ATP7B）基因條帶;二代測序結(jié)果顯示,ATP7B基因修復效率為（7.45±2.54）%。結(jié)論 CRISPR/Cas9 RNP轉(zhuǎn)染能達到較高編輯效率,... 

【文章來源】：中華實驗外科雜志. 2020,37(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：3 頁


本文編號：3611686