背景:癲癇是一類發(fā)病率高、機制復雜的神經系統(tǒng)疾病,多數(shù)難以根治,嚴重影響患者的身心健康和社會功能。顳葉癲癇是一種很常見的癲癇類型,顳葉癲癇發(fā)作引起的海馬神經元損傷和死亡被認為是癲癇發(fā)生發(fā)展中的重要環(huán)節(jié)�，F(xiàn)有的動物實驗和人體實驗都表明,顳葉癲癇發(fā)作會激活一系列促凋亡信號通路,最終引起海馬區(qū)神經元凋亡;而與此同時,細胞內的抗凋亡通路也會反饋性激活,在一定程度上起到保護作用。B細胞淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）是一種抗凋亡蛋白,目前已發(fā)現(xiàn)該蛋白在顳葉癲癇發(fā)作時表達上升,然而鮮有確切證據(jù)表明人工上調bcl-2基因表達能減輕顳葉癲癇引起的海馬損傷。目的:本研究旨在探討人工bcl-2過表達是否會對減輕顳葉癲癇引起的海馬神經元損傷。內容:通過構建bcl-2基因過表達慢病毒載體,在小鼠海人酸顳葉癲癇模型中研究Bcl-2蛋白過表達對海馬細胞凋亡的影響,進而探討B(tài)cl-2通路與顳葉癲癇發(fā)生發(fā)展的關系。方法:1.構建bcl-2基因過表達慢病毒載體:人工合成小鼠bcl-2基因片段,PCR擴增后連接pLV慢病毒載體,導入DH5α大腸桿菌菌株,進行克隆。2.病毒包裝:用三質粒慢病毒系統(tǒng)共轉染HEK293T細胞系,進行... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：26 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１?ｐＬＶ－ＥＧＦＰ－Ｎ載體圖譜

二、實驗結果??１．重組質粒構建??宿主大腸桿菌菌落ＰＣＲ瓊脂糖凝膠電泳結果如圖２所示。選�。�、８、１１、４１、??４２、４３號陽性克隆進行測序，結果反饋：１１、４１、４３號測序成功，人工檢驗測序??結果與原目的基因一致。重組質粒構建成功。三個克隆的具體測序結果如下（５’－３’），??中括號內加粗部分為目的基因片段：??１１?號：ＣＡＧＧＧＧＡＧＣＴＴＡＧＣＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＣＣＧＴＣＡ??ＧＡＴＣＧＣＣＴＧＧＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＣＴＣＣＡＴ??ＡＧＡＡＧＡＣＡＣＣＧＡＣＴＣＴＡＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣＧＣＴＡＧＣＧＣＴＡＣＣＧ??ＧＡＣＴＣ?ＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧ?［ＡＴＧＧＣＧＣ?ＡＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＡＣＡＧＧ??ＧＴＡＴＧ?ＡＴＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧ?ＡＴＧＡＡＧＴＡＣＡＴＡＣＡＴＴＡ??ＴＡＡＧＣＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＧＧＡＴＧ

２．慢病毒包裝??重組慢病毒胎鼠神經元轉染實驗顯示熒光顯微鏡下神經元內出現(xiàn)綠色熒光。證??明病毒構建成功（圖３）。??圖３重組６ｃ／－２過表達病毒感染胎鼠神經元免疫熒光圖像。綠色區(qū)域可見ＥＧＦＰ??表達。左下方框標尺邊長：０．１?ｍｍ。??１６??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]p-JNK/p-c-Jun通路參與大鼠杏仁核點燃癲癇模型[J]. 李巷,潘建青,康慧聰,楊志剛,韓金玲,聶荔,肖小華,張玲玲,朱遂強.  神經損傷與功能重建. 2016(06)
[2]難治性顳葉癲癇海馬和同側前顳葉MRI特征及其與臨床相關性[J]. 曹惠霞,林笑豐,譚偉杰,王俊,杜渭清,韓立新,王蔚,王偉.  放射學實踐. 2014(11)
[3]顳葉癲癇大鼠海馬的體視學研究[J]. 蘇明明,金澎,宋海洋,齊兆鵬,趙鑫.  中華實驗外科雜志. 2012 (09)
[4]Bcl-2、Bax、Caspase-3表達與顳葉癲癎發(fā)病的相關性研究[J]. 孫濤,楊天明,王天路.  神經損傷與功能重建. 2009(03)
[5]耐藥性癲癇患者腦組織中Bcl-2蛋白的表達及臨床意義[J]. 曾艷,王學峰,林濤,何梅,李勁梅,袁潔,王亮,關立峰.  重慶醫(yī)科大學學報. 2008(S1)
[6]海人酸致癇大鼠海馬神經元凋亡研究[J]. 李文,包仕堯,程慶璋.  神經疾病與精神衛(wèi)生. 2003(06)
[7]癲癇大鼠海馬內凋亡神經元超微結構的研究[J]. 隋鴻錦,宮瑾,李冬冬,張萬琴,洪昭雄.  解剖學報. 1999(04)
[8]海仁酸誘導癲癇模型海馬的形態(tài)學改變[J]. 隋鴻錦,張萬琴,洪昭雄.  解剖科學進展. 1997(02)



本文編號：3610830