發(fā)布時(shí)間：2022-01-26 16:44

　　背景:癲癇是一類發(fā)病率高、機(jī)制復(fù)雜的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,多數(shù)難以根治,嚴(yán)重影響患者的身心健康和社會(huì)功能。顳葉癲癇是一種很常見(jiàn)的癲癇類型,顳葉癲癇發(fā)作引起的海馬神經(jīng)元損傷和死亡被認(rèn)為是癲癇發(fā)生發(fā)展中的重要環(huán)節(jié)�，F(xiàn)有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體實(shí)驗(yàn)都表明,顳葉癲癇發(fā)作會(huì)激活一系列促凋亡信號(hào)通路,最終引起海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡;而與此同時(shí),細(xì)胞內(nèi)的抗凋亡通路也會(huì)反饋性激活,在一定程度上起到保護(hù)作用。B細(xì)胞淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）是一種抗凋亡蛋白,目前已發(fā)現(xiàn)該蛋白在顳葉癲癇發(fā)作時(shí)表達(dá)上升,然而鮮有確切證據(jù)表明人工上調(diào)bcl-2基因表達(dá)能減輕顳葉癲癇引起的海馬損傷。目的:本研究旨在探討人工bcl-2過(guò)表達(dá)是否會(huì)對(duì)減輕顳葉癲癇引起的海馬神經(jīng)元損傷。內(nèi)容:通過(guò)構(gòu)建bcl-2基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體,在小鼠海人酸顳葉癲癇模型中研究Bcl-2蛋白過(guò)表達(dá)對(duì)海馬細(xì)胞凋亡的影響,進(jìn)而探討B(tài)cl-2通路與顳葉癲癇發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法:1.構(gòu)建bcl-2基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體:人工合成小鼠bcl-2基因片段,PCR擴(kuò)增后連接pLV慢病毒載體,導(dǎo)入DH5α大腸桿菌菌株,進(jìn)行克隆。2.病毒包裝:用三質(zhì)粒慢病毒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞系,進(jìn)行... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１?ｐＬＶ－ＥＧＦＰ－Ｎ載體圖譜

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果??１．重組質(zhì)粒構(gòu)建??宿主大腸桿菌菌落ＰＣＲ瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如圖２所示。選取７、８、１１、４１、??４２、４３號(hào)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果反饋：１１、４１、４３號(hào)測(cè)序成功，人工檢驗(yàn)測(cè)序??結(jié)果與原目的基因一致。重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。三個(gè)克隆的具體測(cè)序結(jié)果如下（５’－３’），??中括號(hào)內(nèi)加粗部分為目的基因片段：??１１?號(hào)：ＣＡＧＧＧＧＡＧＣＴＴＡＧＣＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＣＣＧＴＣＡ??ＧＡＴＣＧＣＣＴＧＧＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＣＴＣＣＡＴ??ＡＧＡＡＧＡＣＡＣＣＧＡＣＴＣＴＡＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣＧＣＴＡＧＣＧＣＴＡＣＣＧ??ＧＡＣＴＣ?ＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧ?［ＡＴＧＧＣＧＣ?ＡＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＡＣＡＧＧ??ＧＴＡＴＧ?ＡＴＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧ?ＡＴＧＡＡＧＴＡＣＡＴＡＣＡＴＴＡ??ＴＡＡＧＣＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＧＧＡＴＧ

２．慢病毒包裝??重組慢病毒胎鼠神經(jīng)元轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)顯示熒光顯微鏡下神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)綠色熒光。證??明病毒構(gòu)建成功（圖３）。??圖３重組６ｃ／－２過(guò)表達(dá)病毒感染胎鼠神經(jīng)元免疫熒光圖像。綠色區(qū)域可見(jiàn)ＥＧＦＰ??表達(dá)。左下方框標(biāo)尺邊長(zhǎng)：０．１?ｍｍ。??１６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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