目的:1.研究N-乙酰半胱氨酸（NAC）對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞Notch2信號通路的抑制作用并闡明其發(fā)生機(jī)制。2.明確NAC對Notch2信號的抑制效應(yīng)對體內(nèi)外神經(jīng)膠質(zhì)瘤生長的影響,為NAC用于神經(jīng)膠質(zhì)瘤的臨床治療提供了一定的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。方法:1.分別用Western Blotting和Real Time-PCR實(shí)驗(yàn)檢測NAC對U87和U251細(xì)胞Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Hes1和Hey1蛋白水平的影響,Notch2、Hes1和Hey1 m RNA水平的影響,以及CCK8實(shí)驗(yàn)觀察NAC、si-Notch2和si-Notch3對U87和U251細(xì)胞活力的影響。2.Western Blotting實(shí)驗(yàn)觀察NH4Cl和MG132對NAC抑制U87細(xì)胞Notch2蛋白水平的影響,以及NAC對Itch和CRMP5,si-Itch對NAC抑制Notch2蛋白水平的影響。3.活性氧（ROS）實(shí)驗(yàn)檢測NAC、谷胱甘肽（GSH）和依布硒啉（Ebselen）對U87和U251細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響,Western Blotting實(shí)驗(yàn)檢測以上藥物對Notch2蛋白水平的影響,... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

WesternBlotting實(shí)驗(yàn)檢測NAC（濃度梯度）對Notch信號的影響U87

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文36圖1-2WesternBlotting實(shí)驗(yàn)檢測NAC（濃度梯度）對Notch信號的影響U87和U251細(xì)胞用NAC（0，2，5，10，20mM）處理24h后，WesternBlotting檢測Notch2、Notch3、Hes1和Hey1蛋白的表達(dá)，β-actin作為內(nèi)參（n=3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)）圖1-3WesternBlotting實(shí)驗(yàn)檢測NAC（時間梯度）對Notch信號的影響U87和U251細(xì)胞用NAC（10mM）處理0，3，6，12，24h后，WesternBlotting檢測Notch2、Notch3、Hes1和Hey1蛋白的表達(dá)，β-actin作為內(nèi)參（n=3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)）

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文37圖1-4WesternBlotting實(shí)驗(yàn)檢測NAC對Notch1表達(dá)的影響U87和U251細(xì)胞用NAC（10mM）處理24h后，WesternBlotting檢測Notch1蛋白的表達(dá)，β-actin作為內(nèi)參（n=3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)）圖1-5RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測NAC（濃度梯度）對Hes1（A）和Hey1（B）轉(zhuǎn)錄的影響U87和U251細(xì)胞用NAC（0，5，10，20mM）處理24h后，RT-PCR檢測Hes1和Hey1mRNA的表達(dá)，β-actin作為內(nèi)參（n=3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，*P<0.05versusControl）圖1-6RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測NAC（時間梯度）對Hes1（A）和Hey1（B）轉(zhuǎn)錄的影響U87和U251細(xì)胞用NAC（10mM）處理0，6，12，24h后，RT-PCR檢


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