過氧化還原酶6（Peroxiredoxin-6）是過氧化物還原酶家族的一員,它是一個具有雙重酶活性的蛋白,既具有磷脂酶A2的活性,又具有過氧化物還原酶活性。有多篇文獻證實Prdx6在多種疾病中起重要作用,如帕金森病、雅各病、匹克病、肺惡性間皮細胞瘤等。然而,Prdx6在中風(fēng)中的作用尚未得到很好的研究。在本研究中,通過建立SD大鼠大腦中動脈閉塞模型,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法（2,3,5-Triphenyte-trazoliumchloride）和蘇木精—伊紅染色法（HE）鑒定腦缺血模型是否成功。免疫組織化學(xué)法（Immunohistochemistry）觀察Prdx6在大腦中不同腦區(qū)的表達情況,蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）和實時熒光定量PCR（RTPCR）檢測大腦不同腦區(qū)中Prdx6的蛋白和基因表達水平。免疫熒光雙標法觀察Prdx6在神經(jīng)元、小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞中的表達情況。RT-PCR檢測MCAO鼠不同腦區(qū)炎癥因子（i NOS、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10）的m RNA水平以及與Prdx6表達的相關(guān)性。目的:1、觀察MCAO鼠腦中Prdx6表達;2... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表(Abbreviation)
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 實驗材料
    2.1 實驗動物
    2.2 抗體
    2.3 主要試劑和試劑盒
    2.4 引物
    2.5 主要儀器與設(shè)備
    2.6 主要試劑和溶液的配方
3 實驗方法
    3.1 SD大鼠大腦中動脈閉塞模型建立
        3.1.1 SD大鼠來源
        3.1.2 大腦中動脈閉塞模型(MCAO)
        3.1.3 分離大鼠大腦組織
    3.2 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法
    3.3 石蠟切片
        3.3.1 組織固定
        3.3.2 組織脫水、透明
        3.3.3 組織浸蠟與包埋
        3.3.4 組織切片
    3.4 蘇木素-伊紅染色(HE)
    3.5 免疫組織化學(xué)染色(IHC)
    3.6 免疫熒光雙標染色(IF)
    3.7 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)
        3.7.1 引物設(shè)計與合成
        3.7.2 RNA提取
        3.7.3 RT反應(yīng)
        3.7.4 q-PCR擴增
    3.8 蛋白質(zhì)免疫印跡(WB)
        3.8.1 蛋白樣品制備
        3.8.2 SDS-PAGE凝膠制備
        3.8.3 上樣電泳
        3.8.4 轉(zhuǎn)膜
        3.8.5 IB檢測
    3.9 統(tǒng)計分析
4 結(jié)果
    4.1 大鼠MCAO模型造模成功
        4.1.1 使用TTC染色法證明大鼠MCAO造模成功
        4.1.2 HE染色法觀察大鼠腦缺血性損傷
    4.2 MCAO引起大鼠腦組織中星形膠質(zhì)細胞數(shù)量增加
    4.3 局灶性腦缺血增加腦中小膠質(zhì)細胞數(shù)量
    4.4 局灶性腦缺血導(dǎo)致大鼠大腦皮質(zhì)中神經(jīng)元的丟失
    4.5 局灶性腦缺血上調(diào)大腦皮質(zhì)中Prdx6表達
        4.5.1 WB方法檢測Prdx6在大腦皮質(zhì)的表達
        4.5.2 IHC方法檢測Prdx6在不同腦區(qū)的表達
    4.6 缺血再灌注誘導(dǎo)Prdx6在星形膠質(zhì)細胞中表達
    4.7 缺血再灌注誘導(dǎo)Prdx6在神經(jīng)元中的表達
    4.8 Prdx6不在小膠質(zhì)細胞中表達
    4.9 缺血再灌注誘導(dǎo)的Prdx6表達與炎癥因子水平的相關(guān)性
5 討論
6 結(jié)論
7 本研究的創(chuàng)新點
8 參考文獻
附錄
    個人簡歷
    在讀期間的研究成果
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3564235