背景腦膜具有調節(jié)神經干／祖細胞（Neural stem/progenitor cell, NSPC）發(fā)育、分化與皮質神經再生的重要作用,其可誘導皮層NSPC激活反應和產生神經元,繼而轉為血管周細胞隨微血管深入皮層,對胚胎發(fā)育及成年腦損傷后修復具有重要意義。肝細胞生長因子（Hepatocyte growth factor, HGF）為一獨立的促血管生成因子,越來越多的研究顯示其具有神經營養(yǎng)、促神經發(fā)生、血管發(fā)生、軸突發(fā)生、減少瘢痕形成以及促腦室管膜下區(qū)（Subventricular zone, SVZ）神經干細胞增殖、分化作用。我們進行Ad-HGF轉染大鼠腦膜間皮細胞（rat meningeal mesothelial cells, RMMCs）的效率與細胞活性研究,期望為明確腦膜間皮細胞和HGF基因兩者聯(lián)合是否具有促血管新生和神經保護的雙效作用提供實驗基礎,從而進一步為臨床經蛛網膜下腔應用Ad-HGF治療老年性缺血性腦血管病提供實驗基礎和理論依據。目的體外原代培養(yǎng)SD大鼠腦膜間皮細胞并鑒定,用Ad5-EGFP、Ad-HGF轉染RMMCs,測定重組腺病毒轉染細胞的最佳MOI值,觀察轉染后... 

【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院河南省

【文章頁數】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
1 材料與方法
    1.1 實驗動物
    1.2 主要試劑
    1.3 主要儀器
    1.4 主要試劑的配制
    1.5 實驗方法
        1.5.1 大鼠腦膜間皮細胞的體外培養(yǎng)
        1.5.2 大鼠腦膜間皮細胞的鑒定
        1.5.3 Ad5-EGFP轉染大鼠腦膜間皮細胞的最佳MOI值測定
        1.5.4 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對HGF的表達進行測定
        1.5.5 噻唑蘭(MTT)比色法對Ad-HGF轉染后大鼠腦膜間皮細胞增殖能力的測定
        1.5.6 Ad-HGF轉染后大鼠腦膜間皮細胞遷移能力的測定
    1.6 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 大鼠腦膜間皮細胞的體外培養(yǎng)
        2.1.1 腦膜間皮細胞原代培養(yǎng)及倒置相差顯微鏡下細胞形態(tài)學觀察
        2.1.2 大鼠腦膜間皮細胞傳代培養(yǎng)
    2.2 大鼠腦膜間皮細胞的鑒定
        2.2.1 倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)
        2.2.2 免疫細胞化學染色法鑒定結果
        2.2.3 細胞間接免疫熒光染色法鑒定結果
    2.3 Ad5-EGFP轉染大鼠腦膜間皮細胞最佳MOI值測定結果
        2.3.1 熒光顯微鏡觀察法測定結果
        2.3.2 流式細胞儀檢測法測定結果
    2.4 酶聯(lián)免疫吸附法對HGF表達的測定結果
        2.4.1 標準曲線繪制
        2.4.2 不同MOI值的Ad-HGF轉染腦膜間皮細胞后48h上清液中HGF含量測定結果
        2.4.3 Ad-HGF轉染腦膜間皮細胞后不同時間點條件培養(yǎng)液中HGF含量測定結果
    2.5 MTT比色法對Ad-HGF轉染后腦膜間皮細胞增殖能力測定結果
    2.6 Ad-HGF轉染后大鼠腦膜間皮細胞遷移能力測定結果
        2.6.1 細胞劃痕實驗結果
        2.6.2 Transwells細胞遷移實驗結果
3 討論
    3.1 腦膜間皮細胞的分離培養(yǎng)和擴增
        3.1.1 腦膜間皮細胞的概念
        3.1.2 腦膜在中樞神經系統(tǒng)促神經發(fā)育、分化和皮質神經再生的功能研究
        3.1.3 大鼠腦膜間皮細胞的培養(yǎng)與鑒定
    3.2 Ad-HGF轉染腦膜間皮細胞的效率及對細胞增殖、遷移能力的影響
        3.2.1 HGF的基本性狀及生物學功能
        3.2.2 基因轉染載體的選擇
        3.2.3 本課題結果分析
4 結論
附圖
參考文獻
綜述：HGF基因治療缺血性腦血管病的實驗研究進展
    參考文獻
附錄
攻讀學位期間發(fā)表文章情況
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]干細胞/基因聯(lián)合治療[J]. 章靜波.  解剖學報. 2012 (03)
[2]血液稀釋對腦氧代謝影響的研究進展[J]. 沈華春,郭建榮.  醫(yī)學綜述. 2012(02)
[3]肝細胞生長因子基因轉染對人臍靜脈內皮細胞增殖、遷移的影響[J]. 常冰梅,李美寧,劉志貞,張悅紅,程牛亮,牛勃.  中國免疫學雜志. 2011(08)
[4]缺血性腦血管病的基因治療[J]. 唐文雄,郭淮蓮.  中華腦血管病雜志(電子版). 2010(06)
[5]骨髓間充質干細胞治療缺血性腦血管病的研究進展[J]. 潘曉華,劉國榮,姜長春.  內蒙古醫(yī)學雜志. 2010(09)
[6]缺血性腦血管病患者血清肝細胞生長因子含量變化及其臨床意義[J]. 王海燕,杜建時,徐忠信,趙明明,王宇,馬明,趙晴.  中國老年學雜志. 2010(14)
[7]急性大腦半球梗死患者早期神經功能惡化的危險因素分析[J]. 許賢平,楊曉蘇,楊期東.  卒中與神經疾病. 2010(01)
[8]改良法體外培養(yǎng)大鼠腦膜間皮細胞[J]. 魏麗紅,韓素改,李彤.  神經解剖學雜志. 2009(04)
[9]腦膜功能的研究進展[J]. 王婷,趙華洲,王百忍.  解剖學雜志. 2008(03)
[10]Ad-HGF對肺泡Ⅱ型上皮細胞的轉染表達及增殖效應[J]. 哈小琴,呂同德,趙治華,唐瑜,昌業(yè)偉.  第四軍醫(yī)大學學報. 2008(04)



本文編號：3544715