發(fā)布時(shí)間：2021-12-19 16:40

　　背景腦膜具有調(diào)節(jié)神經(jīng)干／祖細(xì)胞（Neural stem/progenitor cell, NSPC）發(fā)育、分化與皮質(zhì)神經(jīng)再生的重要作用,其可誘導(dǎo)皮層NSPC激活反應(yīng)和產(chǎn)生神經(jīng)元,繼而轉(zhuǎn)為血管周細(xì)胞隨微血管深入皮層,對(duì)胚胎發(fā)育及成年腦損傷后修復(fù)具有重要意義。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Hepatocyte growth factor, HGF）為一獨(dú)立的促血管生成因子,越來(lái)越多的研究顯示其具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、促神經(jīng)發(fā)生、血管發(fā)生、軸突發(fā)生、減少瘢痕形成以及促腦室管膜下區(qū)（Subventricular zone, SVZ）神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化作用。我們進(jìn)行Ad-HGF轉(zhuǎn)染大鼠腦膜間皮細(xì)胞（rat meningeal mesothelial cells, RMMCs）的效率與細(xì)胞活性研究,期望為明確腦膜間皮細(xì)胞和HGF基因兩者聯(lián)合是否具有促血管新生和神經(jīng)保護(hù)的雙效作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),從而進(jìn)一步為臨床經(jīng)蛛網(wǎng)膜下腔應(yīng)用Ad-HGF治療老年性缺血性腦血管病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。目的體外原代培養(yǎng)SD大鼠腦膜間皮細(xì)胞并鑒定,用Ad5-EGFP、Ad-HGF轉(zhuǎn)染RMMCs,測(cè)定重組腺病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞的最佳MOI值,觀察轉(zhuǎn)染后... 

【文章來(lái)源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要試劑
    1.3 主要儀器
    1.4 主要試劑的配制
    1.5 實(shí)驗(yàn)方法
        1.5.1 大鼠腦膜間皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        1.5.2 大鼠腦膜間皮細(xì)胞的鑒定
        1.5.3 Ad5-EGFP轉(zhuǎn)染大鼠腦膜間皮細(xì)胞的最佳MOI值測(cè)定
        1.5.4 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)HGF的表達(dá)進(jìn)行測(cè)定
        1.5.5 噻唑蘭(MTT)比色法對(duì)Ad-HGF轉(zhuǎn)染后大鼠腦膜間皮細(xì)胞增殖能力的測(cè)定
        1.5.6 Ad-HGF轉(zhuǎn)染后大鼠腦膜間皮細(xì)胞遷移能力的測(cè)定
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 大鼠腦膜間皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        2.1.1 腦膜間皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及倒置相差顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.1.2 大鼠腦膜間皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)
    2.2 大鼠腦膜間皮細(xì)胞的鑒定
        2.2.1 倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)
        2.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定結(jié)果
        2.2.3 細(xì)胞間接免疫熒光染色法鑒定結(jié)果
    2.3 Ad5-EGFP轉(zhuǎn)染大鼠腦膜間皮細(xì)胞最佳MOI值測(cè)定結(jié)果
        2.3.1 熒光顯微鏡觀察法測(cè)定結(jié)果
        2.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)法測(cè)定結(jié)果
    2.4 酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)HGF表達(dá)的測(cè)定結(jié)果
        2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
        2.4.2 不同MOI值的Ad-HGF轉(zhuǎn)染腦膜間皮細(xì)胞后48h上清液中HGF含量測(cè)定結(jié)果
        2.4.3 Ad-HGF轉(zhuǎn)染腦膜間皮細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)條件培養(yǎng)液中HGF含量測(cè)定結(jié)果
    2.5 MTT比色法對(duì)Ad-HGF轉(zhuǎn)染后腦膜間皮細(xì)胞增殖能力測(cè)定結(jié)果
    2.6 Ad-HGF轉(zhuǎn)染后大鼠腦膜間皮細(xì)胞遷移能力測(cè)定結(jié)果
        2.6.1 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.6.2 Transwells細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3 討論
    3.1 腦膜間皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)和擴(kuò)增
        3.1.1 腦膜間皮細(xì)胞的概念
        3.1.2 腦膜在中樞神經(jīng)系統(tǒng)促神經(jīng)發(fā)育、分化和皮質(zhì)神經(jīng)再生的功能研究
        3.1.3 大鼠腦膜間皮細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定
    3.2 Ad-HGF轉(zhuǎn)染腦膜間皮細(xì)胞的效率及對(duì)細(xì)胞增殖、遷移能力的影響
        3.2.1 HGF的基本性狀及生物學(xué)功能
        3.2.2 基因轉(zhuǎn)染載體的選擇
        3.2.3 本課題結(jié)果分析
4 結(jié)論
附圖
參考文獻(xiàn)
綜述：HGF基因治療缺血性腦血管病的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
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