第一章臍帶間充質干細胞的分離培養(yǎng)鑒定及體外分化研究背景臍帶間充質干細胞（Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,UC-MSCs）主要來自母體妊娠后的臍帶,具有強大的細胞分化潛力和細胞增殖能力,其來源豐富,安全,不存在倫理問題且分化潛力較高在臨床研究中具有很高的價值。臍帶間充質干細胞在體外可被誘導分化為具有神經(jīng)功能的細胞,在臍帶干細胞移植治療腦卒中等神經(jīng)損傷疾病的研究中,給予大鼠靜脈注射臍帶間充質干細胞后,發(fā)現(xiàn)大鼠的運動行為明顯改善。但臍帶間充質干細胞治療神經(jīng)損傷類疾病的治療機理仍不明確。研究目的1.體外獲取臍帶間充質干細胞并進行流式鑒定。2.利用細胞因子進行臍帶間充質干細胞的體外成神經(jīng)誘導分化并進行鑒定。3.模擬體內環(huán)境,構建臍帶間充質干細胞體外炎癥模型,探討共移植細胞因子對臍帶間充質干細胞的影響。研究方法1.臍帶間充質干細胞的分離獲取孕鼠臍帶組織并使用PBS緩沖液洗凈血液,將組織分割后加入胰酶消化并制備單細胞懸液,進行細胞計數(shù)。2.臍帶間充質干細胞的培養(yǎng)將計數(shù)后的細胞,置入含有DMEM/F12的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)并傳代。3.臍帶間充質... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．分離培養(yǎng)的臍帶間充質干細胞，分別在４倍，１０倍，２０倍鏡下細胞生長??

當細胞生長至７０％？８０％時，去除培養(yǎng)基并使用ＰＢＳ洗滌細胞一次，加入誘導培養(yǎng)??基進行培養(yǎng)。收集培養(yǎng)到Ｐ５代體外誘導分化的細胞，分別進行固定，封閉，染色??等處理后在熒光顯微鏡下進行觀察。如圖３所示，體外誘導臍帶間充質干細胞分??化，可表達神經(jīng)膠質細胞標志物ＧＦＡＰ?（紅色），神經(jīng)細胞標志物Ｔｕｊｌ?（綠色）??以及核染色ＤＡＰＩ?（藍色）。結果表明分選的臍帶間充質干細胞在體外可被誘導??分化為神經(jīng)膠質樣細胞。??２６??

入共轉染細胞因子檢測其對臍帶間充質干細胞增殖和凋亡的影響，ＷＢ結果顯??示，共轉染細胞因子可以促進細胞增殖相關蛋白Ｐｉ３ｋ，?Ａｋｔ的表達（Ｐ＜０．０１），??降低凋亡相關分子Ｃａｓｐａｓｅ３的表達（Ｐ＜０．０１）。如圖５Ａ－Ｂ所示??Ｐ－ＰＢｋ??Ｈ?＾?ｍ？？??Ａ?Ｐ＜３ｋ??＝換娜??Ｐ－Ａｋｔ?—?相’ｓ?ｒ＾ｉ?＾??Ａｋｔ?－－??Ｃａｓｐａｓｅ３?｜｜ｌｊ??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｍｍｍ?國：：?曬．：??ｎ狀挪瓶ｍ瓶預?Ｈ；?Ｈ?�。樱�??Ｐｉ３ｋ?ＡＫ１?Ｃｎｐｎｅ３??圖５．?Ａ－Ｂ）共移植細胞因子對臍帶間充質干細胞增殖和凋亡相關分子Ｐｉ３ｋ，??ＡＫＴ，?Ｃａｓｐａｓｅ３表達的影響。??三、結論??１．

【參考文獻】：
期刊論文
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