研究目的:探討PTP1B的敲低是否抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖,遷移和侵襲,以及潛在的機(jī)制。研究方法:體外培養(yǎng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87。設(shè)計(jì)并合成PTP1B干擾質(zhì)粒,以慢病毒為載體轉(zhuǎn)染到U87細(xì)胞中,同時(shí)用空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到U87細(xì)胞中作為對照組,記為空載組（shNC組）。通過蛋白質(zhì)印跡法測定空載組和PTP1B基因特異性shPTP1B組的U87細(xì)胞中PTP1B的蛋白表達(dá)水平,驗(yàn)證基因敲低PTP1B表達(dá)的效率。證實(shí)shPTP1B組中PTP1B表達(dá)水平降低后,通過MTT增殖試驗(yàn)和集落形成試驗(yàn)檢測PTP1B對U87細(xì)胞增殖的影響。采用流式細(xì)胞儀檢測PTP1B敲低后U87細(xì)胞的細(xì)胞周期變化。采用western blot檢測細(xì)胞周期蛋白CDK、E2F、CyclinD1、P21蛋白表達(dá)強(qiáng)度。進(jìn)行細(xì)胞劃痕試驗(yàn)以檢測shNC組和PTP1B基因特異性shPTP1B組U87細(xì)胞的遷移能力。用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測shNC組和shPTP1B組U87細(xì)胞侵襲能力。最后通過Western blot法檢測Src/Ras、PI3K/AKT、p62DOK/RasGAP相關(guān)信號（Src,pSrc418,AKT,P-AKT,ER... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
引言
實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)方法
    1 細(xì)胞培養(yǎng)
    2 構(gòu)建ShPTP1B1 慢病毒載體
    3 MTT實(shí)驗(yàn)檢測PTP1B敲除后對U87 細(xì)胞增殖的影響
    4 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測PTP1B敲除后對單個細(xì)胞增殖的影響
    5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測PTP1B對細(xì)胞遷移的影響
    6 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測PTP1B對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U87 細(xì)胞侵襲的影響
    7 流式細(xì)胞儀檢測PTP1B對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U87 細(xì)胞周期的影響
    8 Western-blot檢測PTP1B對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U87 細(xì)胞相關(guān)蛋白的影響
    9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 PTP1B基因干擾效率
    2 MTT法檢測感染攜帶有shPTP1B1 的慢病毒后對U87 細(xì)胞增殖能力的影響
    3 流式細(xì)胞儀western blot檢測PTP1B對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U87 細(xì)胞周期影響
    4 Transwell小室實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測PTP1B對膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響
    5 PTP1B影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長和遷移的分子機(jī)制
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
英文縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛋白酪氨酸磷酸酶1B在乳腺癌進(jìn)展中的作用（英文）[J]. Shi-chong LIAO,Jin-xin LI,Li YU,Sheng-rong SUN.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2017(04)
[2]2016WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類第4版修訂版概述及膠質(zhì)瘤部分介紹[J].   中華病理學(xué)雜志. 2016 (11)
[3]蛋白酪氨酸磷酸酶1B對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 王禹,高佳音,郭靜,邵學(xué)成,石琨.  生殖與避孕. 2016(07)



本文編號：3533624