RNA干擾是一種有效的基因沉默機(jī)制,通過短雙鏈RNA降解具有其相同序列的目的基因mRNA來抑制基因表達(dá),目前該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于基因功能研究,并為許多惡性疾病的基因治療提供了應(yīng)用前景。腫瘤嚴(yán)重危害人類健康并導(dǎo)致死亡,腦膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤,約占神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的40%-50%,由于呈浸潤性生長,手術(shù)難以徹底根除,尤其需要采用非侵襲性的手段進(jìn)行治療。近年來,基于納米材料的siRNA轉(zhuǎn)染為腫瘤基因治療提供了一條新的途徑。本研究通過兼性的PMAL-C8分子將疏水量子點(diǎn)（QDs）進(jìn)行親水修飾,進(jìn)一步與分子量25KDa的分支狀PEI共價(jià)交聯(lián),制備得到生理狀態(tài)下具有陽離子的熒光納米載體,將其應(yīng)用于siRNA轉(zhuǎn)染顯示：當(dāng)培養(yǎng)基存在血清時(shí),其轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活性都比在無血清狀態(tài)下要好；觀察到由于PEI分子的“質(zhì)子海綿”作用緩慢釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的綠色熒光Alexa Flour488siRNA;當(dāng)QD:siRNA=1:2濃度比例包裝時(shí)能獲得最好的基因敲除效率。腦瘤細(xì)胞U251的蛋白敲除穿膜實(shí)驗(yàn)和基因芯片結(jié)果顯示JAM2分子與細(xì)胞遷移能力相關(guān),但具體調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。本研究揭示了以納米材料-siRNA... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞中英文對照
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 RNA干擾(RNAi)
        1.1.1 RNA干擾(RNAi)的發(fā)展
        1.1.2 RNAi的原理
        1.1.3 RNAi的主要特點(diǎn)
        1.1.4 產(chǎn)生RNAi的幾種機(jī)制
        1.1.5 RNAi與腫瘤基因治療
    1.2 非病毒siRNA轉(zhuǎn)染載體
        1.2.1 陽離子脂質(zhì)體
        1.2.2 陽離子聚合物
        1.2.3 穿膜肽
        1.2.4 無機(jī)材料納米粒子
    1.3 納米傳感器與腫瘤診斷
        1.3.1 呼出氣體樣品中腫瘤標(biāo)志物的檢測
        1.3.2 依賴蛋白標(biāo)志物的腫瘤檢測
2 陽離子納米粒子的制備及理化性質(zhì)
    2.1 前言
    2.2 儀器與試劑
        2.2.1 儀器
        2.2.2 試劑
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 QD-PMAL的制備
        2.3.2 QD-PMAL-PEI25k的制備及表征
        2.3.3 粒徑測定：粒度儀和透射電鏡
        2.3.4 紫外可見分光光度檢測
        2.3.5 熒光分光光度掃描
        2.3.6 QD-PMAL-PEI25k/siRNA結(jié)合比例的確定
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 油相QDs的親水包裝
        2.4.2 不同緩沖液條件下QD-PMAL-PEI25k的合成效果
        2.4.3 粒子粒徑大小和組成
        2.4.4 紫外可見及熒光分光光度掃描結(jié)果
        2.4.5 siRNA吸附能力評(píng)價(jià)
    2.5 小結(jié)
3 陽離子納米粒子介導(dǎo)的siRNA轉(zhuǎn)染條件及機(jī)理研究
    3.1 前言
    3.2 儀器與試劑
        3.2.1 試劑
        3.2.2 儀器
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 U251腦瘤細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 陽離子納米粒子對細(xì)胞毒性測定
        3.3.3 血清對陽離子粒子/siRNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染效率影響
        3.3.4 熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染過程
        3.3.5 陽離子納米粒子/siRNA轉(zhuǎn)染最優(yōu)比例濃度確定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 陽離子納米粒子在有無血清情況下的細(xì)胞毒性
        3.4.2 血清對QD-PMAL-PEI25k/siRNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染效率的影響
        3.4.3 熒光納米粒子復(fù)合物轉(zhuǎn)染過程
        3.4.4 陽離子納米粒子/siRNA轉(zhuǎn)染最優(yōu)比例濃度確定
    3.5 小結(jié)
4 U251腦瘤細(xì)胞系JAM2基因功能研究
    4.1 前言
    4.2 儀器與試劑
        4.2.1 試劑
        4.2.2 儀器
    4.3 試驗(yàn)方法
        4.3.1 免疫組化實(shí)驗(yàn)(SABC法)
        4.3.2 Westen blot驗(yàn)證蛋白敲除實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 轉(zhuǎn)膜遷徙實(shí)驗(yàn)
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 SABC法免疫組化檢測腦瘤樣本表面JAM2蛋白表達(dá)
        4.4.2 Western blot驗(yàn)證蛋白敲除效果
        4.4.3 Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        4.4.4 JAM2沉默后細(xì)胞基因表達(dá)譜分析
    4.5 小結(jié)
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3510166