RNA干擾是一種有效的基因沉默機制,通過短雙鏈RNA降解具有其相同序列的目的基因mRNA來抑制基因表達,目前該技術已被廣泛應用于基因功能研究,并為許多惡性疾病的基因治療提供了應用前景。腫瘤嚴重危害人類健康并導致死亡,腦膠質瘤是神經系統(tǒng)最常見的腫瘤,約占神經系統(tǒng)腫瘤的40%-50%,由于呈浸潤性生長,手術難以徹底根除,尤其需要采用非侵襲性的手段進行治療。近年來,基于納米材料的siRNA轉染為腫瘤基因治療提供了一條新的途徑。本研究通過兼性的PMAL-C8分子將疏水量子點（QDs）進行親水修飾,進一步與分子量25KDa的分支狀PEI共價交聯(lián),制備得到生理狀態(tài)下具有陽離子的熒光納米載體,將其應用于siRNA轉染顯示：當培養(yǎng)基存在血清時,其轉染效率和細胞活性都比在無血清狀態(tài)下要好；觀察到由于PEI分子的“質子海綿”作用緩慢釋放進入細胞質的綠色熒光Alexa Flour488siRNA;當QD:siRNA=1:2濃度比例包裝時能獲得最好的基因敲除效率。腦瘤細胞U251的蛋白敲除穿膜實驗和基因芯片結果顯示JAM2分子與細胞遷移能力相關,但具體調控機制仍需進一步研究。本研究揭示了以納米材料-siRNA... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞中英文對照
1 文獻綜述
    1.1 RNA干擾(RNAi)
        1.1.1 RNA干擾(RNAi)的發(fā)展
        1.1.2 RNAi的原理
        1.1.3 RNAi的主要特點
        1.1.4 產生RNAi的幾種機制
        1.1.5 RNAi與腫瘤基因治療
    1.2 非病毒siRNA轉染載體
        1.2.1 陽離子脂質體
        1.2.2 陽離子聚合物
        1.2.3 穿膜肽
        1.2.4 無機材料納米粒子
    1.3 納米傳感器與腫瘤診斷
        1.3.1 呼出氣體樣品中腫瘤標志物的檢測
        1.3.2 依賴蛋白標志物的腫瘤檢測
2 陽離子納米粒子的制備及理化性質
    2.1 前言
    2.2 儀器與試劑
        2.2.1 儀器
        2.2.2 試劑
    2.3 試驗方法
        2.3.1 QD-PMAL的制備
        2.3.2 QD-PMAL-PEI25k的制備及表征
        2.3.3 粒徑測定：粒度儀和透射電鏡
        2.3.4 紫外可見分光光度檢測
        2.3.5 熒光分光光度掃描
        2.3.6 QD-PMAL-PEI25k/siRNA結合比例的確定
    2.4 結果與討論
        2.4.1 油相QDs的親水包裝
        2.4.2 不同緩沖液條件下QD-PMAL-PEI25k的合成效果
        2.4.3 粒子粒徑大小和組成
        2.4.4 紫外可見及熒光分光光度掃描結果
        2.4.5 siRNA吸附能力評價
    2.5 小結
3 陽離子納米粒子介導的siRNA轉染條件及機理研究
    3.1 前言
    3.2 儀器與試劑
        3.2.1 試劑
        3.2.2 儀器
    3.3 試驗方法
        3.3.1 U251腦瘤細胞培養(yǎng)
        3.3.2 陽離子納米粒子對細胞毒性測定
        3.3.3 血清對陽離子粒子/siRNA復合物轉染效率影響
        3.3.4 熒光顯微鏡觀察轉染過程
        3.3.5 陽離子納米粒子/siRNA轉染最優(yōu)比例濃度確定
    3.4 結果與討論
        3.4.1 陽離子納米粒子在有無血清情況下的細胞毒性
        3.4.2 血清對QD-PMAL-PEI25k/siRNA復合物轉染效率的影響
        3.4.3 熒光納米粒子復合物轉染過程
        3.4.4 陽離子納米粒子/siRNA轉染最優(yōu)比例濃度確定
    3.5 小結
4 U251腦瘤細胞系JAM2基因功能研究
    4.1 前言
    4.2 儀器與試劑
        4.2.1 試劑
        4.2.2 儀器
    4.3 試驗方法
        4.3.1 免疫組化實驗(SABC法)
        4.3.2 Westen blot驗證蛋白敲除實驗
        4.3.3 轉膜遷徙實驗
    4.4 結果與討論
        4.4.1 SABC法免疫組化檢測腦瘤樣本表面JAM2蛋白表達
        4.4.2 Western blot驗證蛋白敲除效果
        4.4.3 Transwell細胞遷移實驗
        4.4.4 JAM2沉默后細胞基因表達譜分析
    4.5 小結
5 結論
參考文獻
個人簡歷



本文編號：3510166