[目的]通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究重組腺病毒KGHV500對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞生物活性等的影響,通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究CIK攜帶重組腺病毒KGHV500共同介導(dǎo)抗p21Ras單鏈抗體治療裸鼠腦膠質(zhì)瘤移植瘤的效果及靶向性,實(shí)現(xiàn)抗p21Ras單鏈抗體在腦膠質(zhì)瘤中的持續(xù)長(zhǎng)效表達(dá),為治療腦膠質(zhì)瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及新方法。[方法]一、重組腺病毒KGHV500和KGHV400的擴(kuò)增、濃縮、純化、鑒定:體外利用HEK293細(xì)胞將重組腺病毒KGHV500大量擴(kuò)增;經(jīng)PCR鑒定其是否含有纖毛片段和單鏈抗體片段;經(jīng)雙重氯化銫密度梯度離心法純化重組腺病毒,利用TCID50法測(cè)其滴度;KGHV500以不同MOI值感染人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞,以確定KGHV500感染人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的最佳感染復(fù)數(shù)。二、體外實(shí)驗(yàn):免疫組織化學(xué)檢測(cè)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞表面CD46蛋白的表達(dá)情況;透射電鏡觀察重組腺病毒KGHV500、KGHV400對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的感染情況;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)KGHV500對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移能力的影響;MTT比色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)KGHV500對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞活力的影響;Transwell侵襲小室... 

【文章來(lái)源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＫＧＨＶ５００腺病毒結(jié)構(gòu)示意圖??

昆明醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果??重組腺病毒ＫＧＨＶ５００、ＫＧＨＶ４００的擴(kuò)増、鑒定、純化、滴度測(cè)定以１細(xì)胞的ＭＯＩ測(cè)定??ＨＥＫ２９３細(xì)胞培養(yǎng)和傳代??本實(shí)驗(yàn)采用ＨＥＫ２９３細(xì)胞對(duì)重組腺病毒進(jìn)行包裝及擴(kuò)增，ＨＥＫ２９３細(xì)腎細(xì)胞，是貼壁依賴型的上皮樣細(xì)胞，表現(xiàn)出典型的腺病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的允許５型腺病毒和其他血清型腺病毒在其上增殖，用含１０％ＦＢＳ的ＥＭ培養(yǎng)液在３７°Ｃ、５％Ｃ０２細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)到９０％密度％胰酶消化傳代，在實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備好所需細(xì)胞。??

全圯?熒光???４?ＫＧＨＶ４００?感染?２９３?細(xì)胞?３２ｈ?〇２００）??Ｋ２９３細(xì)胞３２小時(shí)，ＨＥＫ２９３細(xì)胞變痩、變。??Ｖ５００的鑒定??腺病毒ＫＧＨＶ５００原液，將其ＤＮＡ作病毒ＤＮＡ中的ＳｃＦｖ片段，Ｆ５／３５條帶，證實(shí)重組腺病毒含有ＳｃＦｖ片段，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CIK細(xì)胞在荷瘤鼠體內(nèi)的腫瘤靶向性與安全性[J]. 劉霞,胡奇嬋,王濤,黃睿,崔靜,王麗,楊舉倫.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2014(04)
[2]RAS蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J]. 曹壘,王穎毅,王希瑞,王協(xié)鋒,孫關(guān),駱慧,劉寧,尤永平.  中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志. 2012 (02)

碩士論文
[1]CIK細(xì)胞和重組腺病毒KGHV500共同介導(dǎo)抗p21ras單鏈抗體治療胃癌的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 洪艷玲.昆明醫(yī)科大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3508333