目的原代培養(yǎng)出具有干細(xì)胞特性的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞并進(jìn)行體內(nèi)體外的鑒定，為膠質(zhì)瘤干細(xì)胞靶向治療實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。方法術(shù)中留取高級別膠質(zhì)瘤標(biāo)本（術(shù)后病理證實(shí)WHOⅢ或以上膠質(zhì)瘤），組織胰酶消化法提取細(xì)胞，用懸浮神經(jīng)球培養(yǎng)方法培養(yǎng)出膠質(zhì)瘤干細(xì)胞（Glioblastomastem-like cell, GSC）；免疫熒光法、RT-PCR法檢測GSCs表面標(biāo)志物，在裸鼠（Bulb/cnude mice）顱內(nèi)再次成瘤實(shí)驗(yàn)檢測GSCs成瘤性。對數(shù)據(jù)采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果在懸浮神經(jīng)球干細(xì)胞培養(yǎng)條件下，成功培養(yǎng)出成球生長的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞球（GSC-Sph）；RT-PCR、Western Blotting和免疫熒光檢測提示原代培養(yǎng)的GSCs高表達(dá)CD133（3.02%⁴.92%）; Western Blotting檢測提示GSCs在蛋白水平高表達(dá)Nestin；將原代培養(yǎng)的GSCs種植于裸鼠腦內(nèi)，8周后成瘤，成功構(gòu)建裸鼠原位移植瘤模型。結(jié)論通過留取人高級別膠質(zhì)瘤原代懸浮神經(jīng)球干細(xì)胞培養(yǎng)方法可以得到具有干細(xì)胞特性的GSCs。其高表達(dá)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD133和Nestin。GSCs... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

原代GSCs在干細(xì)胞條件和分化條件下鏡下觀A：干細(xì)胞懸浮培養(yǎng)條件培養(yǎng)基(DMEM-F12含20%BIT，EGF20ng/ml,bFGF20ng/ml,

附 圖圖 1 原代 GSCs 在干細(xì)胞條件和分化條件下鏡下觀A：干細(xì)胞懸浮培養(yǎng)條件培養(yǎng)基 (DMEM-F12 含 20%BIT，EGF 20 ng/ml, bFGF 20 ng/LIF 10 ng/ml, 1 × B27)下呈球懸浮生長；B：GSCs放到含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，24 h后細(xì)胞貼壁生長，并有小的突起從細(xì)胞邊緣伸出。

GSCs呈球懸浮生長，CD133染色陽性，種植于裸鼠腦內(nèi)平均8周成瘤，HE染色證實(shí)顱內(nèi)成瘤

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3502243