特異性CTL對(duì)移植性小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤免疫治療的研究
發(fā)布時(shí)間:2021-11-16 03:01
目的:樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)是動(dòng)物體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞(antigenprocessing cell,APC)。在捕獲腫瘤細(xì)胞之后,DC遷移到淋巴結(jié)中將腫瘤抗原呈遞給T淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)其成為具有腫瘤特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxicT lymphocyte,CTL),后者能特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外培養(yǎng)小鼠的脾T淋巴細(xì)胞,經(jīng)負(fù)載神經(jīng)膠質(zhì)瘤抗原的DC激活后,使之成為具有抗腫瘤特異性的CTL,未負(fù)載腫瘤抗原的則為非特異性CTL,將特異性CTL和非特異性CTL作為對(duì)比實(shí)驗(yàn),輸入移植性小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型中,通過(guò)測(cè)量腫瘤體積以及HE染色等實(shí)驗(yàn)技術(shù),研究腫瘤特異性CTL在小鼠體內(nèi)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制以及殺傷作用。方法:在小鼠骨髓中分離得到細(xì)胞懸液,以rhGM-CSF、rhIL-4、和TNF-α進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),定期觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,收集其中的部分細(xì)胞做流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,F(xiàn)CM)分析,確定其為可以使用的DC細(xì)胞。用神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凍融抗原刺激DC,使之成為DC疫苗。制備小鼠脾T細(xì)胞,進(jìn)行體外培養(yǎng),并和DC疫苗共培養(yǎng),從而誘導(dǎo)產(chǎn)生具有腫瘤抗原特異性的CT...
【文章來(lái)源】:河北師范大學(xué)河北省
【文章頁(yè)數(shù)】:67 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
MHCI類抗原加工以及抗原呈遞途徑
經(jīng)被用來(lái)解釋發(fā)生變化的多肽的差別效應(yīng)。這些模型包括信號(hào)傳導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的變化,免疫突觸的形成,負(fù)信號(hào)的誘導(dǎo)以及 TCR 或者共刺激分子的補(bǔ)充。此外,在沒(méi)有 T 細(xì)胞增殖的刺激下,細(xì)胞溶解的誘導(dǎo)也能夠被肽對(duì) MHC 降低的親和力所引發(fā);這凸顯了肽與 MHC 之間的相互作用在 TCR 參與中作為一個(gè)重要的決定因素。因此,應(yīng)該指出,肽拮抗劑不僅對(duì)于 MHCI 類分子的約束力而競(jìng)爭(zhēng),而且改變了 T 細(xì)胞活化的級(jí)聯(lián)過(guò)程(圖 2)。效應(yīng) CTL 的產(chǎn)生要求至少有三個(gè)連續(xù)信號(hào):(1)TCR 連接反應(yīng);(2)共刺激信號(hào)傳輸,例如,CD28-B7 的相互作用;(3)IL-2 介導(dǎo)的信號(hào)。未激活的幼稚 CD8+T 細(xì)胞不表達(dá) IL-2 及其受體,這是在 TCR 和 CD28-介導(dǎo)的信號(hào)之上誘導(dǎo)的。這些信號(hào)誘導(dǎo) IL-2 產(chǎn)生的量,但是,可能對(duì)于充分激活沒(méi)有足夠的保證。在這種情況下,活化的 Th 細(xì)胞可能提供額外的 IL-2。
2 結(jié) 果 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和 DC 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察.1 神經(jīng)膠質(zhì)瘤 C6 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察倒置相差顯微鏡對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤 C6 細(xì)胞進(jìn)行觀察,100 倍物鏡呈長(zhǎng)梭形或多邊形,傳代當(dāng)天 4 h 后細(xì)胞呈球形半貼壁生長(zhǎng),已經(jīng)出現(xiàn)全貼壁生長(zhǎng),但是細(xì)胞數(shù)量較少,細(xì)胞排列較稀疏(細(xì)胞繁殖較迅速,在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)兩天即可達(dá)到 80%的細(xì)胞融
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]MUC1/Y基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及MUC1、MUC1/Y體外修飾DC誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答[J]. 劉虹,任秀寶,魏楓,尹志偉,郝希山. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2004(07)
[2]腫瘤抗原致敏樹(shù)突狀細(xì)胞瘤苗治療顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 劉福生,王忠誠(chéng),歷俊華,林松,任銘,肖慶,張亞卓. 中華神經(jīng)外科雜志. 2002(02)
[3]MAGE-1修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)殺傷人肝癌細(xì)胞[J]. 劉彬彬,葉勝龍,賀平,鄭寧,趙燕,孫瑞霞,湯釗猷. 中華肝臟病雜志. 2001(03)
[4]人外周血樹(shù)突狀細(xì)胞的體外擴(kuò)增及鑒定[J]. 朱學(xué)軍,曹雪濤,于益芝,陳國(guó)友,萬(wàn)濤,馬施華,唐華,章衛(wèi)平. 中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 1997(04)
本文編號(hào):3498038
【文章來(lái)源】:河北師范大學(xué)河北省
【文章頁(yè)數(shù)】:67 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
MHCI類抗原加工以及抗原呈遞途徑
經(jīng)被用來(lái)解釋發(fā)生變化的多肽的差別效應(yīng)。這些模型包括信號(hào)傳導(dǎo)動(dòng)力學(xué)的變化,免疫突觸的形成,負(fù)信號(hào)的誘導(dǎo)以及 TCR 或者共刺激分子的補(bǔ)充。此外,在沒(méi)有 T 細(xì)胞增殖的刺激下,細(xì)胞溶解的誘導(dǎo)也能夠被肽對(duì) MHC 降低的親和力所引發(fā);這凸顯了肽與 MHC 之間的相互作用在 TCR 參與中作為一個(gè)重要的決定因素。因此,應(yīng)該指出,肽拮抗劑不僅對(duì)于 MHCI 類分子的約束力而競(jìng)爭(zhēng),而且改變了 T 細(xì)胞活化的級(jí)聯(lián)過(guò)程(圖 2)。效應(yīng) CTL 的產(chǎn)生要求至少有三個(gè)連續(xù)信號(hào):(1)TCR 連接反應(yīng);(2)共刺激信號(hào)傳輸,例如,CD28-B7 的相互作用;(3)IL-2 介導(dǎo)的信號(hào)。未激活的幼稚 CD8+T 細(xì)胞不表達(dá) IL-2 及其受體,這是在 TCR 和 CD28-介導(dǎo)的信號(hào)之上誘導(dǎo)的。這些信號(hào)誘導(dǎo) IL-2 產(chǎn)生的量,但是,可能對(duì)于充分激活沒(méi)有足夠的保證。在這種情況下,活化的 Th 細(xì)胞可能提供額外的 IL-2。
2 結(jié) 果 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和 DC 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察.1 神經(jīng)膠質(zhì)瘤 C6 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察倒置相差顯微鏡對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤 C6 細(xì)胞進(jìn)行觀察,100 倍物鏡呈長(zhǎng)梭形或多邊形,傳代當(dāng)天 4 h 后細(xì)胞呈球形半貼壁生長(zhǎng),已經(jīng)出現(xiàn)全貼壁生長(zhǎng),但是細(xì)胞數(shù)量較少,細(xì)胞排列較稀疏(細(xì)胞繁殖較迅速,在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)兩天即可達(dá)到 80%的細(xì)胞融
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]MUC1/Y基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及MUC1、MUC1/Y體外修飾DC誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答[J]. 劉虹,任秀寶,魏楓,尹志偉,郝希山. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2004(07)
[2]腫瘤抗原致敏樹(shù)突狀細(xì)胞瘤苗治療顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 劉福生,王忠誠(chéng),歷俊華,林松,任銘,肖慶,張亞卓. 中華神經(jīng)外科雜志. 2002(02)
[3]MAGE-1修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)殺傷人肝癌細(xì)胞[J]. 劉彬彬,葉勝龍,賀平,鄭寧,趙燕,孫瑞霞,湯釗猷. 中華肝臟病雜志. 2001(03)
[4]人外周血樹(shù)突狀細(xì)胞的體外擴(kuò)增及鑒定[J]. 朱學(xué)軍,曹雪濤,于益芝,陳國(guó)友,萬(wàn)濤,馬施華,唐華,章衛(wèi)平. 中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 1997(04)
本文編號(hào):3498038
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