本文關(guān)鍵詞：瑞舒伐他汀預(yù)處理對(duì)局灶性缺血再灌注大鼠自噬水平的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的腦卒中是目前全球長期致殘的主要原因之一,也是導(dǎo)致城鎮(zhèn)居民死亡的第三位因素。據(jù)統(tǒng)計(jì),85%～90%的發(fā)病人群為缺血性卒中,缺血再灌注損傷是致殘和致死的主要原因。近年來研究表明,除了炎癥及氧化應(yīng)激反應(yīng),過度激活的自噬也參與了IRI的病理進(jìn)程。臨床研究結(jié)果也顯示抑制過度激活的自噬反應(yīng)可以緩解腦缺血再灌注損傷、發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。他汀類藥物作為臨床推薦神經(jīng)保護(hù)劑取得了廣泛運(yùn)用,研究者在心臟缺血再灌注損傷模型中發(fā)現(xiàn),該類藥物不僅具有抗炎及抗氧化應(yīng)激的作用,還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬水平。瑞舒伐他汀是經(jīng)典他汀類藥物之一,屬于選擇性HMG-CoA還原酶抑制劑,具有半衰期長、體內(nèi)血藥濃度高等優(yōu)點(diǎn)。研究表明,瑞舒伐他汀預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng)具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡和局部炎性反應(yīng)有關(guān)。然而,細(xì)胞自噬是否參與了腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)系統(tǒng)損傷機(jī)制,以及該病理過程是否受到瑞舒伐他汀的調(diào)控,國內(nèi)研究尚為空白。本研究采用栓線法建立大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)局灶性急性腦缺血再灌注大鼠模型,觀察腦缺血再灌注損傷過程中缺血半暗帶神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞病理形態(tài)及自噬水平的變化；并選擇瑞舒伐他汀作為神經(jīng)保護(hù)劑,分析瑞舒伐他汀預(yù)處理是否也可以通過調(diào)節(jié)自噬水平發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,為進(jìn)一步完善其潛在的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制提供數(shù)據(jù)支撐。方法1局灶性急性腦缺血再灌注大鼠模型的制備選取健康成年雄性SD大鼠75只,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組、MCAO模型組、瑞舒伐他汀預(yù)處理組和溶劑組5組,各組15只�？瞻讓�(duì)照組正常飼養(yǎng)；MCAO模型組、瑞舒伐他汀預(yù)處理組和溶劑組采用栓線法建立MCAO局灶性急性腦缺血再灌注大鼠模型,栓塞時(shí)長90 min；假手術(shù)組僅給予頸部皮膚切開和頸總動(dòng)脈游離系線處理,不進(jìn)行栓塞。除此之外,瑞舒伐他汀預(yù)處理組和溶劑組分別于模型制備前(缺血前)30min腹腔注射瑞舒伐他汀和二甲基亞砜(DMSO)。90min后拔出線栓,即完成缺血后再灌注模型制備。采用改良神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度評(píng)分(mNSS)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,評(píng)價(jià)模型制備成功率。2缺血半暗帶神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)觀察缺血再灌注(拔出線栓)90min后,采用TTC染色法測(cè)定腦梗死面積,電鏡下觀察缺血半暗帶內(nèi)神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和自噬泡數(shù)量。3細(xì)胞自噬激活定位和水平測(cè)定采用免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn),觀察LC-3B與NeuN、LC-3B與GFAP、LC-3B與Iba-1的雙標(biāo)圖像,確定自噬激活位置是在神經(jīng)元內(nèi)還是膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)。采用免疫蛋白印跡(Western Blot)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腦缺血半暗帶區(qū)域自噬體膜蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3A、3B (LC-3A, LC-3B)及前自噬體膜蛋白Beclinl的表達(dá)量。4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組之間的比較行單因素方差分析,期間任意兩組之間的比較行LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比或百分比表示,行卡方檢驗(yàn)；等級(jí)資料行秩和檢驗(yàn)；P0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1模型評(píng)價(jià)空白對(duì)照組和假手術(shù)組未出現(xiàn)神經(jīng)功能損害癥狀,mNSS評(píng)分均為0;MCAO模型組、瑞舒伐他汀預(yù)處理組和溶劑組均出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能損害癥狀,mNSS平均分分別為(11.2±1.26)分、(10.9±1.12)分、(11.44±1.31)分,其組間的mNSS評(píng)分有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,瑞舒伐他汀預(yù)處理組明顯低于其他兩組(P0.05)。2缺血半暗帶神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)TTC染色后,腦梗死區(qū)域呈現(xiàn)蒼白色,非腦梗死區(qū)域呈現(xiàn)紅色,蒼白色區(qū)域與大腦中動(dòng)脈供血區(qū)域一致。就梗死面積而言,瑞舒伐他汀預(yù)處理組較MCAO模型組和溶劑組小,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05); MCAO模型組和溶劑組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。此外,瑞舒伐他汀預(yù)處理組凋亡細(xì)胞和自噬泡數(shù)量較MCAO模型組和溶劑組少,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); MCAO模型組和溶劑組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3細(xì)胞自噬激活定位和水平免疫熒光共聚焦顯微鏡下,LC-3B為綠色熒光,NeuN為紅色熒光,缺血半暗帶區(qū)域呈現(xiàn)綠色熒光和紅色熒光重疊色-橙色,說明LC-3B主要定位于神經(jīng)元細(xì)胞。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,MCAO模型組、瑞舒伐他汀預(yù)處理組和溶劑組的LC-3A, LC-3B及Beclin1蛋白表達(dá)水平明顯高于空白對(duì)照組和假手術(shù)組(P0.05),空白對(duì)照組和假手術(shù)組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；瑞舒伐他汀預(yù)處理組的LC-3A, LC-3B及Beclin1蛋白表達(dá)水平明顯低于MCAO模型組和溶劑組(P0.05), MCAO模型組和溶劑組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論1缺血缺氧性損傷能夠促進(jìn)缺血半暗區(qū)自噬泡和自噬溶酶體的形成,啟動(dòng)自噬反應(yīng),且存在細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡共存的特點(diǎn)。2自噬因子LC主要表達(dá)于神經(jīng)元,星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞也有少量分布,合理調(diào)控三種神經(jīng)細(xì)胞的自噬轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,均有可能起到神經(jīng)保護(hù)作用。3半暗區(qū)自噬因子LC-3A、LC-3B及Beclin1的表達(dá)上調(diào),瑞舒伐他汀能夠下調(diào)LC-3A、LC-3B及Beclin1的表達(dá),抑制神經(jīng)細(xì)胞自噬,從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,可能為其治療缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：瑞舒伐他汀 MCAO大鼠模型 腦缺血再灌注損傷 自噬 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號(hào)說明13-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-26
• 結(jié)果26-36
• 討論36-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-59
• 致謝59-60
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：瑞舒伐他汀預(yù)處理對(duì)局灶性缺血再灌注大鼠自噬水平的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：349767