本文關鍵詞：長時程二甲雙胍預處理通過誘導自噬發(fā)揮腦保護作用的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:腦卒中是全世界致死的第二大原因和致殘的主要原因。腦卒中后的致殘往往會給患者帶來如偏癱,失語等后遺癥,使患者生活質量大大下降,同時給患者家庭和社會帶來沉重的負擔。目前關于腦卒中的發(fā)病機制已有大量的研究報道,但臨床上仍然缺少有效的治理措施。研究發(fā)現(xiàn)臨床上用于治療二型糖尿病的一線藥物二甲雙胍能夠有效的降低腦卒中發(fā)生率,并減少腦卒中后梗死面積,且其神經(jīng)保護作用與降糖作用并沒有明顯的關聯(lián)[1,2]。而二甲雙胍作為AMPK的激活劑,更引起了人們的關注和研究。大量文獻報道AMPK作為能量的主要感受器和調節(jié)器在腦卒中發(fā)生后起著重要的作用,并能夠通過下游多種通路包括抑制小膠質細胞的活性,抑制NF-k B,減輕炎癥介質的釋放,緩解炎癥的損傷;抑制MMP-9的表達,增加了ZO-1等蛋白的表達,減輕血腦屏障的損傷;對PCG-a以及下游分子TFAM,NRF1的作用,增加線粒體的再生,抑制神經(jīng)元凋亡。但是作為AMPK下游重要的調控靶點—自噬,在長時程二甲雙胍預處理后在腦卒中發(fā)揮何種作用以及在長時程二甲雙胍預處理AMPK的活性升高可能會影響腦組織的代謝增加糖酵解作用,促進乳酸的水平增加以及對熱休克蛋白表達的影響尚未有所報道。本實驗運用C57BL/6小鼠,采用大腦中動脈阻塞(MCAO)模型進行研究,以及利用抑制劑3-MA,Compound C等研究自噬在長時程二甲雙胍預處理時的腦保護作用。實驗一:檢測觀察長時程二甲雙胍預處理后腦組織的保護作用及機制目的:探討長時程二甲雙胍預處理后缺血再灌注6h AMPK活化水平的變化以及乳酸的水平方法:1)觀察長時程二甲雙胍預處理后腦組織的保護作用。采用C57BL/6小鼠隨機分為2組:MCAO組和Met+MCAO組,建立MCAO模型,檢測缺血再灌注后24h小鼠神經(jīng)行為學評分以及腦梗死容積。2)在缺血再灌注后早期6h AMPK的活化水平和乳酸的水平。采用C57BL/6小鼠隨機分為4組,Sham組,Met組,MCAO組和Met+MCAO組,建立MCAO模型。觀察缺血再灌注后6h AMPK活化水平的表達。3)觀察長時程二甲雙胍預處理后,缺血再灌注后24h后,缺血半暗帶凋亡細胞的表達。結果:長時程二甲雙胍預處理后能夠有效地減少小鼠腦缺血再灌注24h梗死面積,改善神經(jīng)行為學評分。在長時程二甲雙胍預處理組缺血再灌注后6h時AMPK活化水平相比MCAO組反而降低,乳酸水平降低,缺血半暗帶細胞凋亡減少。結論:長時程二甲雙胍預處理后能夠起到腦保護作用,降低缺血再灌注6h AMPK的活化水平,降低乳酸水平。實驗二自噬在長時程二甲雙胍預處理的表達以及神經(jīng)保護作用的機制研究目的:探討自噬在長時程二甲雙胍預處理的表達以及作用的研究方法:1)觀察長時程二甲雙胍預處理后自噬水平的變化。采用C57BL/6小鼠隨機分為4組:Sham組、Met、MCAO組和Met+MCAO組。建立MCAO模型觀察在缺血再灌注后6h,24h的自噬的表達水平。免疫熒光觀察LC3的表達情況,western blot檢測LC3,Beclin-1以及p62的表達。2)側腦室給予抑制劑3-MA后,觀察自噬對長時程二甲雙胍預處理后腦保護作用的影響。采用C57BL/6小鼠隨機分為3組Met+MCAO、Veh+Met+MCAO組和3-MA+Met+MCAO組建立MCAO模型,檢測缺血再灌注后24h小鼠腦梗死容積以及神經(jīng)行為學評分3)側腦室給予抑制劑3-MA后,觀察長時程二甲雙胍預處理后自噬的表達水平。采用C57BL/6小鼠隨機分為3組Met+MCAO組、Veh+Met+MCAO組和3-MA+Met+MCAO組,建立MCAO模型。western blot檢測LC3,Beclin-1以及p62的表達,檢測缺血再灌注后6h,24h的自噬水平的變化。。4)側腦室給予抑制劑3-MA后,觀察長時程二甲雙胍預處理后Hsp70表達水平。采用C57BL/6小鼠隨機分為3組Met+MCAO、Veh+Met+MCAO組和3-MA+Met+MCAO組,建立MCAO模型,western blot檢測Hsp70表達。5)腹腔注射抑制劑Compound C后,觀察長時程二甲雙胍預處理后對腦保護作用的影響。采用C57BL/6小鼠隨機分為3組Met+MCAO組、Veh+Met+MCAO組和CC+Met+MCAO組,建立MCAO模型。檢測再缺血再灌注后24h小鼠腦梗死容積以及神經(jīng)行為學評分。6)觀察腹腔注射抑制劑Compound C后,檢測在缺血再灌注后6h,24h的自噬水平的變化。采用C57BL/6小鼠隨機分為3組Met+MCAO、Veh+Met+MCAO組和CC+Met+MCAO組,建立MCAO,western blot檢測LC3,Beclin-1以及p62的表達。7)腹腔注射抑制劑Compound C后,觀察長時程二甲雙胍預處理后缺血再灌注24h AMPK的活化表達水平及在缺血再灌注6h時乳酸的變化水平。采用C57BL/6小鼠隨機分為3組Met+MCAO組、Veh+Met+MCAO組和CC+Met+MCAO組,建立MCAO模型,western blot和乳酸試劑盒檢測。結果:長時程二甲雙胍預處理后在Met組6h,24h及Met+MCAO組在缺血再灌注6h,24h時免疫熒光顯示LC3表達增多以及western blot顯示自噬相關蛋白表達升高。在側腦室給予抑制劑3-MA后,3-MA+Met+MCAO組相比Met+MCAO組在缺血再灌注后24h腦梗死面積擴大神經(jīng)行為學評分下降同時western blot結果顯示在3-MA+Met+MCAO組自噬的相關表達蛋白降低,且在缺血再灌注后24h時發(fā)現(xiàn)在3-MA+Met+MCAO組Hsp70的水平也發(fā)生降低,證明自噬也參與了對Hsp70的調節(jié)。在腹腔注射抑制劑Compound C后,發(fā)現(xiàn)在24h時相比Met+MCAO組,CC+Met+MCAO組腦梗死面積擴大及神經(jīng)行為學評分下降而CC+Met+MCAO組乳酸的水平與Met+MCAO組降低,在缺血再灌注24h時CC+Met+MCAO組相比Met+MCAO組AMPK活化水平也下降同時自噬的水平也明顯的降低,進一步證實在長時程二甲雙胍預處理時自噬發(fā)揮著主要神經(jīng)保護作用。結論:長時程二甲雙胍預處理能夠增加自噬的表達水平發(fā)揮主要的神經(jīng)保護作用,同時自噬參與了對Hsp70的水平的調控。小結:證實在長時程二甲雙胍預處理后AMPK的活化水平在早期6h降低,降低了乳酸的水平減輕了細胞凋亡。而同時提高了自噬的水平的表達,參與了對Hsp70的調節(jié)發(fā)揮腦保護作用。
【關鍵詞】：長時程二甲雙胍預處理 自噬 乳酸 AMPK 熱休克蛋白70
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-22
• 實驗一 長時程二甲雙胍預處理具有腦缺血保護作用22-35
• 1 材料22-24
• 2 方法24-29
• 3 結果29-33
• 4 討論33-35
• 實驗二 長時程二甲雙胍預處理主要通過升高自噬水平來發(fā)揮腦保護作用35-49
• 1 材料35
• 2 方法35-38
• 3 結果38-46
• 4 討論46-49
• 小結49-50
• 參考文獻50-58
• 個人簡歷和研究成果58-59
• 致謝59

【參考文獻】

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1 朱柳;羅承鋒;袁牧;陳敏生;季紅;;葛根素固體脂質納米粒保護長爪沙鼠腦缺血-再灌注損傷的分子機制初探[J];中藥材;2010年12期

  本文關鍵詞：長時程二甲雙胍預處理通過誘導自噬發(fā)揮腦保護作用的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：350193