替莫唑胺（TMZ）是抗膠質母細胞瘤的首選化療藥物,但腫瘤對TMZ的化療耐藥性限制了其臨床應用。盡管自噬被認為與化療耐藥及化療下細胞存活的適應性應答相關,但其精確的分子機制仍不清楚。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)替莫唑胺增加TRPC5表達并上調(diào)基礎自噬水平,而且神經(jīng)膠質瘤細胞中自噬水平的上調(diào)是由TRPC5介導的。同時,TRPC5的敲除在體外和體內(nèi)均上調(diào)膠質瘤細胞對化療的敏感性。此外,我們采用TRPC5-siRNA和藥物抑制證實CaMKKβ/AMPKα/mTOR通路在替莫唑胺治療期間可介導自噬使細胞存活。而且具有替莫唑胺耐藥性的U87細胞系保持著高基礎自噬水平,而TRPC5敲除或是自噬被抑制的U87細胞系對替莫唑胺抗性降低�？傊�,我們的研究揭示了TRPC5可作為激活自噬的起始因子,通過CaMKKβ/AMPKα/mTOR途徑上調(diào)膠質瘤細胞對TMZ的抗性,提示TRPC5可作為膠質瘤化療中抗藥性的新治療靶點。 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

TMZ上調(diào)神經(jīng)膠質瘤細胞中TRPC5的表達和自噬水平（A）用400nMTMZ處理神經(jīng)膠質瘤U87/WT細胞48小時，通過免疫印跡分析TRPC5和LC3的蛋白質表達

12圖 2.TRPC5 促進膠質瘤細胞中 TMZ 誘導的自噬（A）用 TRPC5-siRNA 或 control-siRNA 轉染 U87/WT 細胞 24 小時，然后用 TMZ 處理 48小時。通過 Fura-2 AM 法測定轉染前后細胞內(nèi)鈣離子濃度。通過免疫印跡分析 LC3 的蛋

南京醫(yī)科大學碩士學位論文白水平表達。結果表明 TRPC5-siRNA 降低細胞內(nèi)鈣離子濃度及 LC3-II 的蛋白表達。（B）免疫熒光圖像顯示 TRPC5-siRNA 降低 U87/WT 細胞中平均每個細胞的 LC3 數(shù)量。（C）用TRPC5-siRNA 或 control-siRNA 轉染 U87/TMZ 細胞 24 小時，然后用 TMZ 處理 48 小時。通過免疫印跡分析 LC3 的蛋白水平表達。結果表明 TRPC5-siRNA 降低 U87/TMZ 細胞 LC3-II的蛋白表達。（D 和 E）用 TRPC5 質粒轉染 U87/WT 細胞，通過 Fura-2 AM 法測定轉染前后細胞內(nèi)鈣離子濃度。通過免疫印跡分析 LC3 的蛋白水平表達。結果表明 TRPC5 過表達上調(diào)細胞內(nèi)鈣離子濃度及 LC3-II 的蛋白表達。免疫熒光圖像顯示 TRPC5 過表達上調(diào)U87/WT 細胞中平均每個細胞的 LC3 數(shù)量。


本文編號：3481019