本文關(guān)鍵詞：磷酯酰膽堿特異性磷脂酶C在蛛網(wǎng)膜下腔出血引起的早期腦損傷中的作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:應(yīng)用SAH后EBI模型,探討磷酯酰膽堿特異性磷脂酶C在蛛網(wǎng)膜下腔出血引起的早期腦損傷中的作用及其機制。方法:第一步,將成年雄性SD大鼠72只,隨機分為假手術(shù)組(sham組,n=18)、SAH+溶劑對照組(n=18)、SAH+D609-L(低劑量為5毫克/千克)組(n=18)和SAH+D609-H(高劑量為10毫克/千克)組(n=18)。D609由Sigma(M-5250)購買,并和溶劑對照組一樣溶解在生理鹽水中。D609和和溶劑對照組在SAH半小時之后以相同劑量腹腔內(nèi)注入。上述所有組,分別在SAH后12小時,24小時和48小時取得大鼠的血液及腦組織樣本,每個時間點各取六只大鼠研究PC-PLC的活性,以及D609對PC-PLC活性的影響。第二步,將96只老鼠隨機分為四組:假手術(shù)組,SAH+溶劑對照組,SAH+D609-L組和SAH+D609-H組(n=24每組)。基于時間進程研究的結(jié)果,在SAH之后48小時,取得大鼠的血液和腦組織樣本。每一組的24只老鼠中,6只進行血腦屏障(BBB)完整性檢測,6只進行腦水腫指數(shù)評價,同時每組中取6只大鼠的腦組織包埋在石蠟中,切成4微米厚度的石蠟切片用于進行末端轉(zhuǎn)移酶缺口末端標(biāo)記(TUNEL)染色和免疫熒光分析,每組其它6只大鼠的腦組織進行勻漿并溶解在冰冷RIPA裂解緩沖液(Beyotime,P0013),用于進行Western blot分析。通過玻璃巴斯德移液管進行眶后穿刺收集大鼠的血液,隨后從血液中獲得血清并儲存在-80℃冰箱內(nèi),直至用于PC-PLC活性和炎性細(xì)胞因子分析。然后,所有大鼠經(jīng)水合氯醛深度麻醉(36毫克/100克體重)后,除了需要進行腦水腫評估的大鼠之外,對剩余大鼠使用冰冷PBS進行心臟灌流后,取出腦組織。結(jié)果:一般觀察所有實驗組大鼠的體重,平均動脈血壓,體溫或注射動脈血氣數(shù)據(jù)均未發(fā)生顯著變化。大鼠死亡率,假手術(shù)組為0%(0/42),SAH組為11.8%(17/143)。前交叉池注血可能導(dǎo)致自主呼吸停止,一般持續(xù)時間約10秒,很快恢復(fù)正常呼吸。SAH后大鼠腦組織和血清中PC-PLC活性上調(diào)與假手術(shù)組相比,SAH組大鼠腦組織中PC-PLC活性顯著升高。這種PC-PLC活性在腦組織內(nèi)的升高,在SAH誘導(dǎo)后24小時和48小時更為突出。所有血清樣本也進行了PC-PLC酶活性測定。在假手術(shù)組,血清PC-PLC活性處于低水平,在SAH誘導(dǎo)后24小時沒有發(fā)生明顯變化,但是在SAH誘導(dǎo)后48小時的大鼠血清中,檢測到了PC-PLC活性的顯著增加。值得注意的是,D609以10毫克/千克給藥時同時有效抑制了SAH誘導(dǎo)的腦組織和血清中的PC-PLC活性。而D609以5毫克/千克給藥時僅能抑制SAH后24小時和48小時腦組織內(nèi)的PC-PLC活性升高,這表明大劑量D609對SAH導(dǎo)致的PC-PLC活性升高有更加強大的抵抗作用。PC-PLC活性抑制減弱了由SAH導(dǎo)致的神經(jīng)行為學(xué)障礙與假手術(shù)組相比,在SAH誘導(dǎo)后48小時,大鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的神經(jīng)行為學(xué)障礙,當(dāng)使用兩個劑量的D609進行腹腔注射后,神經(jīng)行為學(xué)障礙出現(xiàn)明顯的逆轉(zhuǎn)。此外,與低劑量D609相比,高劑量D609對于改善SAH大鼠神經(jīng)功能缺損具有更好的效果。PC-PLC活性抑制逆轉(zhuǎn)SAH所致的腦損傷為了評估D609治療SAH后血腦屏障完整性的效果,我們進行了伊文思藍外滲測定。與假手術(shù)組相比,伊文思藍外滲在SAH組中檢測時顯著升高。伊文思藍外滲平均值在給予兩種劑量的D609進行治療后都出現(xiàn)了下降。結(jié)果顯示D609治療可以減輕大鼠SAH模型后的血腦屏障損傷。隨后,我們進行腦含水量測定來評價D609治療對于SAH后腦水腫的影響。SAH引起腦含水量顯著增加,在D609治療后腦含水量明顯減少。結(jié)果表明SAH加重腦水腫,D609治療顯著減輕了腦水腫。PC-PLC活性的抑制減弱SAH誘導(dǎo)的神經(jīng)元和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡為了研究D609誘導(dǎo)的SAH后腦保護的底層機制,采用TUNEL/的Neu N和定量TUNEL/v WF的雙重免疫標(biāo)記來定量神經(jīng)元和大腦細(xì)胞凋亡指數(shù)的改變。與假手術(shù)組相比,SAH組神經(jīng)元和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡指數(shù)均顯著提高。值得注意的是,與SAH組相比,D609治療恢復(fù)了腦部神經(jīng)元和腦微血管內(nèi)皮TUNEL陽性細(xì)胞百分比。Western blot檢測顯示,D609治療減弱了凋亡蛋白引起的蛋白質(zhì)水平增高,其中包括由SAH誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性胱天蛋白酶3和bax。所有的結(jié)果都證實了D609對于SAH后神經(jīng)細(xì)胞和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗凋亡效應(yīng)。PC-PLC介導(dǎo)了SAH誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)隨著越來越多的證據(jù)表明PC-PLC對于細(xì)胞凋亡和炎癥之間串?dāng)_起到了重要作用,我們測試了D609對炎癥相關(guān)因子,包括IL-1β,IL-6和TNF-α的血漿濃度的影響。測量顯示SAH組IL-1β,IL-6和TNF-α的血漿濃度增加。值得注意的是,D609的治療顯著減少了IL-6和TNF-α的血漿濃度,這表明了D609的抗炎作用。但是,D609治療無法顯著減少IL-1β的血漿濃度。Oxy Hb上調(diào)培養(yǎng)神經(jīng)元的PC-PLC的活性我們進一步分析了Oxy Hb是否會改變體外培養(yǎng)的原代大鼠皮層神經(jīng)元中PC-PLC的活性。使用Oxy Hb對培養(yǎng)的原代大鼠皮層神經(jīng)元進行24小時的刺激,發(fā)現(xiàn)PC-PLC活性增加。此外,Oxy Hb介導(dǎo)的PC-PLC酶激活過程,在使用D609治療后出現(xiàn)明顯的終止。PC-PLC活性抑制明顯提高了經(jīng)過Oxy Hb處理的神經(jīng)元的存活率為了進一步明確PC-PLC在SAH誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞凋亡中的潛在作用,我們測試了D609對Oxy Hb處理的原代培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)元存活率的影響。首先進行的形態(tài)學(xué)測定法結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,Oxy Hb處理后的神經(jīng)元表現(xiàn)出體細(xì)胞和神經(jīng)元分枝凝集功能缺失,這與神經(jīng)元細(xì)胞死亡的形態(tài)學(xué)特征是一致的。值得注意的是,兩個劑量的D609均能顯著緩解Oxy Hb誘導(dǎo)的形態(tài)學(xué)變化。此外,與對照組相比,低劑量D609輕微和不顯著的增加了神經(jīng)元的存活率,而高劑量D609則顯著增加了神經(jīng)元存活率。結(jié)論:SAH時循環(huán)和腦組織中的PC-PLC活性上調(diào),這可能導(dǎo)致過度炎癥反應(yīng)的發(fā)生,并損害血腦屏障的完整性,這一點通過使用PC-PLC抑制劑作為SAH誘導(dǎo)的EBI的治療策略進一步得到了證實。因此,我們推測,D609能抑制PC-PLC的活性,從而減輕炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡,并最終逆轉(zhuǎn)SAH誘導(dǎo)的血腦屏障損傷和腦水腫。
【關(guān)鍵詞】：蛛網(wǎng)膜下腔出血 早期腦損傷 磷酯酰膽堿特異性磷脂酶C D609
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.35
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-17
• 參考文獻14-17
• 材料與方法17-25
• 結(jié)果25-35
• 討論35-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-42
• 綜述42-55
• 參考文獻49-55
• 附圖55-58
• 中英文縮略詞表58-59
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文59-60
• 致謝60-61

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1 唐惠麗,趙成三,李會廷;乙狀竇血栓性靜脈炎并蛛網(wǎng)膜下腔出血1例[J];湖北省衛(wèi)生職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年04期

2 薛佩云;短途轉(zhuǎn)送蛛網(wǎng)膜下腔出血病人的護理[J];邯鄲醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報;2000年01期

3 鄭桂芝,徐峰,夏淑艷;蛛網(wǎng)膜下腔出血210例診治分析[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2000年08期

4 李衛(wèi)軍,賈志斌,李樹林;蛛網(wǎng)膜下腔出血誤診原因分析[J];河南實用神經(jīng)疾病雜志;2000年02期

5 呂愛紅,范惠先,劉君華;脊蛛網(wǎng)膜下腔出血一例報告[J];河南實用神經(jīng)疾病雜志;2000年03期

6 文靜,王國慶,尹曉剛;蛛網(wǎng)膜下腔出血12例誤診分析[J];河南實用神經(jīng)疾病雜志;2000年05期

7 許建華;18例蛛網(wǎng)膜下腔出血的誤診分析[J];寧波醫(yī)學(xué);2000年06期

8 胡成蓮;老年人非典型蛛網(wǎng)膜下腔出血誤診分析[J];青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年02期

9 劉建輝,冀鳳云,王婷,房樹志,解旭東,姚斌;老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血42例分析[J];人民軍醫(yī);2000年09期

10 蔣軍,王榮秀;50例蛛網(wǎng)膜下腔出血的治療探討[J];職業(yè)衛(wèi)生與病傷;2000年04期

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1 劉國榮;張京芬;;中國蛛網(wǎng)膜下腔出血流行病學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 林傳成;;警暢老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血附140例老年人蛛血特點分析[A];老年學(xué)論文集——福建省首次老齡問題學(xué)術(shù)研討會論文選[C];1995年

3 王廣;;蛛網(wǎng)膜下腔出血并發(fā)急性梗阻性腦積水的診斷與治療(附二例報告)[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)學(xué)會第六次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];1996年

4 余新民;;老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血誤診分析[A];第三屆全國中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2000年

5 李志東;張樹雄;邸曉鹿;;不典型蛛網(wǎng)膜下腔出血31例報道[A];第三屆全國少數(shù)民族地區(qū)神經(jīng)病學(xué)會論文匯編[C];2005年

6 麥衛(wèi)國;謝穎;黃天云;;對特殊類型蛛網(wǎng)膜下腔出血影像的再認(rèn)識[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

7 裘國松;周增杰;;老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血的臨床特點[A];中國民政康復(fù)醫(yī)學(xué)第四屆學(xué)術(shù)會議論文集[C];1993年

8 王茂旭;曲中;王洪琛;;飲酒、損傷與蛛網(wǎng)膜下腔出血的關(guān)系[A];第四次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文集（上卷）[C];1991年

9 袁志新;;談蛛網(wǎng)膜下腔出血[A];中國法醫(yī)學(xué)最新科研與實踐（一）——全國第六次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文精選[C];2000年

10 丁美萍;程慧;樓敏;;自發(fā)性局限性蛛網(wǎng)膜下腔出血的臨床病例分析[A];2011年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

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1 黃遠(yuǎn)桃;老人蛛網(wǎng)膜下腔出血易誤診[N];大眾衛(wèi)生報;2004年

2 霍濱;蛛網(wǎng)膜下腔出血可呈現(xiàn)癲癇發(fā)作[N];健康報;2006年

3 白軼南;蛛網(wǎng)膜下腔出血后易復(fù)發(fā)[N];健康時報;2007年

4 禾豐;頭痛與蛛網(wǎng)膜下腔出血[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2007年

5 指導(dǎo)專家 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院腦血管病醫(yī)院第三科主任 蔣曉江 記者 李艷 通訊員 朱廣平;蛛網(wǎng)膜下腔出血 保守治療風(fēng)險高[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2006年

6 王惠英 臧海玉;精神異常者要警惕蛛網(wǎng)膜下腔出血[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

7 衣曉峰　王慧穎 記者 韓雪;蛛網(wǎng)膜下腔出血研究獲突破[N];黑龍江日報;2011年

8 霍濱;蛛網(wǎng)膜下腔出血也可表現(xiàn)為癲癇發(fā)作[N];家庭醫(yī)生報;2005年

9 趙強 楊聲瑞;蛛網(wǎng)膜下腔出血治療技術(shù)創(chuàng)新[N];中國醫(yī)藥報;2005年

10 ;蛛網(wǎng)膜下腔出血急救方法[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2008年

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1 于濤;兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦微循環(huán)改變的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2005年

2 荊朝暉;自噬在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用及機制研究[D];浙江大學(xué);2012年

3 李志清;蛛網(wǎng)膜下腔出血后血腦屏障通透性變化及其調(diào)控機制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

4 史煥昌;Celecoxib對實驗性蛛網(wǎng)膜下腔出血腦血管痙攣作用研究[D];四川大學(xué);2006年

5 陳敬寅;褪黑素調(diào)節(jié)的自噬在蛛網(wǎng)膜下腔出血早期腦損傷中的作用及機制研究[D];浙江大學(xué);2015年

6 于耀宇;蛛網(wǎng)膜下腔出血的分子病理及腰池引流的基礎(chǔ)與臨床研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 李平;蛛網(wǎng)膜下腔出血的基礎(chǔ)和臨床研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

8 高陽;依達拉奉治療大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血神經(jīng)保護機制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

9 陳笛;藁苯內(nèi)酯對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血的神經(jīng)保護作用及其機制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

10 徐寧;蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的診斷與治療的相關(guān)研究[D];吉林大學(xué);2004年

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1 熊平;促紅細(xì)胞生成素對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后血管痙攣防治作用的實驗研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

2 陳揚;實驗性蛛網(wǎng)膜下腔出血后海馬微血管密度及側(cè)腦室脈絡(luò)叢的變化[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

3 徐祥;mTOR信號通路在蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用及機制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

4 陳軍輝;阿托伐他汀對兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的保護作用及其機制的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 李波;磷酯酰膽堿特異性磷脂酶C在蛛網(wǎng)膜下腔出血引起的早期腦損傷中的作用及其機制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

6 何昊沅;腦動脈血管壁在兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后結(jié)構(gòu)性重建的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

7 鄒敏剛;MMP-9、ZO-1及Cx43在蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣機制中的相關(guān)研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

8 高安舉;Neurexin-1β及Neuroligin-1與蛛網(wǎng)膜下腔出血后認(rèn)知功能損害的關(guān)系研究[D];蘇州大學(xué);2015年

9 任寶鑫;Wnt3a在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中對神經(jīng)細(xì)胞自噬和凋亡的影響[D];山東大學(xué);2015年

10 錢聰;地塞米松對蛛網(wǎng)膜下腔出血后蛛網(wǎng)膜纖維化的作用[D];浙江大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：磷酯酰膽堿特異性磷脂酶C在蛛網(wǎng)膜下腔出血引起的早期腦損傷中的作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：347606