神經(jīng)炎癥是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（腦和脊髓）應對病原體所進行的一種免疫應答反應,主要由神經(jīng)膠質細胞發(fā)揮功能。神經(jīng)膠質細胞分為大膠質細胞和小膠質細胞兩類,其中小膠質細胞是最早發(fā)生免疫應答的細胞。慢性神經(jīng)炎癥會與多種神經(jīng)退行性疾病有關,如阿爾茲海默癥（AD）、帕金森�。≒D）、肌萎縮性側索硬化癥（ALS）等。因此抑制神經(jīng)炎癥反應對于神經(jīng)退行性疾病的防治具有重要意義。近年來,非甾體有機硒類化合物在精神類疾病中的探究逐漸引發(fā)關注。本文以LPS激活的小鼠小膠質細胞BV2為細胞炎癥模型,從氧化應激和炎癥反應兩個角度,共同探究9種非甾體有機硒類化合物對于激活的小膠質細胞的炎癥保護作用。研究結果如下:（1）以LPS構建激活的BV2細胞炎癥模型,利用Nitrite、iNOS含量變化和BV2細胞活力變化,初步篩選出9種非甾體有機硒類化合物的最佳工作濃度為3μM和30μM。LPS激活的BV2細胞中,NO的氧化形式Nitrite含量上升,NO的來源iNOS含量上調。加入9種非甾體有機硒類化合物培養(yǎng)24 h后,有效降低了兩者含量,同時不影響細胞活力。（2）進一步篩選9種非甾體有機硒類化合物對LPS激活的BV2細胞中氧化應... 

【文章來源】：遼寧大學遼寧省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度的LPS對BV2細胞Nitrite釋放和細胞活力的影響。利用不同濃度的LPS溶液處理BV2細胞,檢測細胞上清液Nritite水平變化(左)和細胞活力(右)。n=6,mean±SD,***P<0.001 vs.control group.

本實驗通過設置LPS溶液的不同濃度梯度(0.01、0.1、1、10μg/ml LPS)探究造模的最佳濃度。如圖1-1(左圖)所示,與對照組比較,0.01、0.1、1、10μg/ml LPS刺激BV2細胞均可顯著增加Nitrite釋放水平,且隨LPS濃度增大而增加。如圖1-1(右圖)所示4種濃度的LPS溶液對于細胞的生存活力影響不大。并且10μg/ml LPS誘導BV2細胞釋放Nitrite水平較1μg/ml LPS未顯著增加,因此選取較低濃度1μg/ml LPS作為造模濃度,建立BV2細胞炎癥模型。在倒置熒光顯微鏡下觀察靜息狀態(tài)和1μg/ml LPS處理后激活狀態(tài)的BV2細胞形態(tài)上的差異。如圖1-2(左圖)為靜息狀態(tài)的BV2細胞,細胞胞體小,細胞膜緊實,少有空泡。如圖1-2(右圖)為1μg/ml LPS處理后激活狀態(tài)的BV2細胞,細胞體膨脹,逐漸向“阿米巴樣”變化。細胞內空泡較多,細胞膜松散,輪廓不清晰,由此可見1μg/ml LPS可以作為激活BV2細胞的合適濃度。

本實驗共計9種非甾體有機硒類化合物,樣品編號分別為1-39、1-40、1-43、1-44、1A-38、1A-39、1A-40、1A-46、1A-49。上述有機硒類化合物都是在非甾體抗炎藥舒林酸的結構基礎上,引入硒類藥效基團進行改造合成。如圖1-3所示,9種非甾體有機硒類化合物在不同的濃度梯度(3μM、10μM、30μM、100μM)下均減少了Nitrite釋放量。相較于其他硒類化合物,1-39、1-44、1A-38、1A-40具有更好的作用效果。而比較4種濃度梯度之間,秉持藥物篩選的微量高效原則,選取低濃度3μM和高濃度30μM為最佳作用濃度。如圖1-4所示,3μM、10μM、30μM、100μM等4個濃度對于細胞活性影響不大,相較于1-44和1A-40來說,1-39和1A-38的3μM和30μM濃度具有更好的效果,無論是在減少Nitrite釋放還是細胞活力等方面。誘導型一氧化氮合酶是機體活性氮產(chǎn)生的催化酶。當機體受到損傷時,iNOS的表達量上調,釋放大量的NO。因此實驗檢測了9種非甾體有機硒類化合物的不同濃度對于LPS激活的BV2細胞iNOS轉錄水平的影響。如圖1-5所示,加入非甾體有機硒類化合物處理細胞后,明顯降低了LPS誘導的BV2細胞iNOS表達量,與圖1-3的實驗結果一致,對于1-39和1A-38來說,抑制效果更加顯著。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Progress of Targeting Transforming Growth Factor-β1 Small Interfering RNA in Liver Fibrosis[J]. Xuan Zhou,Xue-feng Yang.  Chinese Medical Sciences Journal. 2014(04)
[2]Liver physiology and liver diseases in the elderly[J]. Kazuto Tajiri,Yukihiro Shimizu.  World Journal of Gastroenterology. 2013(46)



本文編號：3470002