神經(jīng)炎癥是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（腦和脊髓）應(yīng)對病原體所進(jìn)行的一種免疫應(yīng)答反應(yīng),主要由神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮功能。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分為大膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞兩類,其中小膠質(zhì)細(xì)胞是最早發(fā)生免疫應(yīng)答的細(xì)胞。慢性神經(jīng)炎癥會(huì)與多種神經(jīng)退行性疾病有關(guān),如阿爾茲海默癥（AD）、帕金森�。≒D）、肌萎縮性側(cè)索硬化癥（ALS）等。因此抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)對于神經(jīng)退行性疾病的防治具有重要意義。近年來,非甾體有機(jī)硒類化合物在精神類疾病中的探究逐漸引發(fā)關(guān)注。本文以LPS激活的小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞BV2為細(xì)胞炎癥模型,從氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)兩個(gè)角度,共同探究9種非甾體有機(jī)硒類化合物對于激活的小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥保護(hù)作用。研究結(jié)果如下:（1）以LPS構(gòu)建激活的BV2細(xì)胞炎癥模型,利用Nitrite、iNOS含量變化和BV2細(xì)胞活力變化,初步篩選出9種非甾體有機(jī)硒類化合物的最佳工作濃度為3μM和30μM。LPS激活的BV2細(xì)胞中,NO的氧化形式Nitrite含量上升,NO的來源iNOS含量上調(diào)。加入9種非甾體有機(jī)硒類化合物培養(yǎng)24 h后,有效降低了兩者含量,同時(shí)不影響細(xì)胞活力。（2）進(jìn)一步篩選9種非甾體有機(jī)硒類化合物對LPS激活的BV2細(xì)胞中氧化應(yīng)... 

【文章來源】：遼寧大學(xué)遼寧省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度的LPS對BV2細(xì)胞Nitrite釋放和細(xì)胞活力的影響。利用不同濃度的LPS溶液處理BV2細(xì)胞,檢測細(xì)胞上清液Nritite水平變化(左)和細(xì)胞活力(右)。n=6,mean±SD,***P<0.001 vs.control group.

本實(shí)驗(yàn)通過設(shè)置LPS溶液的不同濃度梯度(0.01、0.1、1、10μg/ml LPS)探究造模的最佳濃度。如圖1-1(左圖)所示,與對照組比較,0.01、0.1、1、10μg/ml LPS刺激BV2細(xì)胞均可顯著增加Nitrite釋放水平,且隨LPS濃度增大而增加。如圖1-1(右圖)所示4種濃度的LPS溶液對于細(xì)胞的生存活力影響不大。并且10μg/ml LPS誘導(dǎo)BV2細(xì)胞釋放Nitrite水平較1μg/ml LPS未顯著增加,因此選取較低濃度1μg/ml LPS作為造模濃度,建立BV2細(xì)胞炎癥模型。在倒置熒光顯微鏡下觀察靜息狀態(tài)和1μg/ml LPS處理后激活狀態(tài)的BV2細(xì)胞形態(tài)上的差異。如圖1-2(左圖)為靜息狀態(tài)的BV2細(xì)胞,細(xì)胞胞體小,細(xì)胞膜緊實(shí),少有空泡。如圖1-2(右圖)為1μg/ml LPS處理后激活狀態(tài)的BV2細(xì)胞,細(xì)胞體膨脹,逐漸向“阿米巴樣”變化。細(xì)胞內(nèi)空泡較多,細(xì)胞膜松散,輪廓不清晰,由此可見1μg/ml LPS可以作為激活BV2細(xì)胞的合適濃度。

本實(shí)驗(yàn)共計(jì)9種非甾體有機(jī)硒類化合物,樣品編號(hào)分別為1-39、1-40、1-43、1-44、1A-38、1A-39、1A-40、1A-46、1A-49。上述有機(jī)硒類化合物都是在非甾體抗炎藥舒林酸的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上,引入硒類藥效基團(tuán)進(jìn)行改造合成。如圖1-3所示,9種非甾體有機(jī)硒類化合物在不同的濃度梯度(3μM、10μM、30μM、100μM)下均減少了Nitrite釋放量。相較于其他硒類化合物,1-39、1-44、1A-38、1A-40具有更好的作用效果。而比較4種濃度梯度之間,秉持藥物篩選的微量高效原則,選取低濃度3μM和高濃度30μM為最佳作用濃度。如圖1-4所示,3μM、10μM、30μM、100μM等4個(gè)濃度對于細(xì)胞活性影響不大,相較于1-44和1A-40來說,1-39和1A-38的3μM和30μM濃度具有更好的效果,無論是在減少Nitrite釋放還是細(xì)胞活力等方面。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶是機(jī)體活性氮產(chǎn)生的催化酶。當(dāng)機(jī)體受到損傷時(shí),iNOS的表達(dá)量上調(diào),釋放大量的NO。因此實(shí)驗(yàn)檢測了9種非甾體有機(jī)硒類化合物的不同濃度對于LPS激活的BV2細(xì)胞iNOS轉(zhuǎn)錄水平的影響。如圖1-5所示,加入非甾體有機(jī)硒類化合物處理細(xì)胞后,明顯降低了LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞iNOS表達(dá)量,與圖1-3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,對于1-39和1A-38來說,抑制效果更加顯著。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Progress of Targeting Transforming Growth Factor-β1 Small Interfering RNA in Liver Fibrosis[J]. Xuan Zhou,Xue-feng Yang.  Chinese Medical Sciences Journal. 2014(04)
[2]Liver physiology and liver diseases in the elderly[J]. Kazuto Tajiri,Yukihiro Shimizu.  World Journal of Gastroenterology. 2013(46)



本文編號(hào)：3470002