第一部分大鼠脂肪干細胞與原代皮層神經(jīng)元分離、培養(yǎng)與鑒定【背景】脂肪干細胞是來源于脂肪組織的成體間充質(zhì)干細胞的一種,在多種神經(jīng)疾病,如退行性變、炎性脫髓鞘、卒中等動物疾病模型中發(fā)揮了重要的治療及神經(jīng)保護作用。因此本研究旨在探索脂肪干細胞參與神經(jīng)修復(fù)的能力及機制。【目的】體外分離、培養(yǎng)穩(wěn)定傳代的脂肪干細胞和成熟的原代皮層神經(jīng)元細胞�！痉椒ā恐靖杉毎〔挠�4-6周齡,體重160 g雌性SD大鼠,大鼠腹股溝區(qū)的脂肪組織在無菌條件下取出,切碎,I膠原酶在中消化45分鐘,等體積完全培養(yǎng)基終止消化,離心后接種于完全培養(yǎng)基中,3天換液一次,7-8天后根據(jù)生長情況予以傳代處理。原代大鼠皮層神經(jīng)元取材于胎齡16-17天的SD胎鼠,剝?nèi)ツX膜,皮層切碎,胰蛋白酶消化消化15分鐘,三倍體積的完全培養(yǎng)基終止消化,巴氏吸管吹打,細胞接種于多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)皿中,4小時后更換為神經(jīng)元培養(yǎng)基,3天半量換液一次�！窘Y(jié)果】體外培養(yǎng)的脂肪干細胞呈紡錘形,貼壁生長,ADSCs高表達CD44（86.69%）和CD29（98.49%）,而不表達造血干細胞標志物CD45、極低表達內(nèi)皮細胞標志物CD34（8.61%）。體外分離培養(yǎng)... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【圖文】：

不同時期體外培養(yǎng)的脂肪干細胞形態(tài)特征

圖 2 穩(wěn)定傳代的 P3 代脂肪干細胞流式細胞學(xué)鑒定（A）不同表面抗體在 P3 代脂肪干細胞流式鑒定結(jié)果；（B）穩(wěn)定傳代的 P3 代脂肪干細胞高表達間充質(zhì)干細胞的表面標記物 CD29、CD44，低表達造血干細胞的表面標記物 CD34、CD45；2. 體外培養(yǎng) 11 天的大鼠皮層神經(jīng)元形態(tài)及鑒定我們對培養(yǎng) 11 天左右的神經(jīng)元進行免疫熒光鑒定。如圖 3 所示，體外培養(yǎng) 11天的神經(jīng)元胞體圓且小，突觸豐富，細胞間相互連接成網(wǎng)。 MAP2 是成熟神經(jīng)元特異性的標志物，神經(jīng)元胞體和神經(jīng)突觸被染色呈紅色熒光， 胞核呈藍色。共制作細胞爬片 6 張，每張取 4 個視野，計數(shù) MAP2 陽性細胞數(shù)。各爬片陽性率見表 1，陽性率為 96.17±1.62%，細胞純度可用于進行后續(xù)實驗。

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文表 1 不同細胞爬片神經(jīng)元 MAP2 陽性細胞率視野 1 視野 2 視野 3 視野 4 平均陽性率（%）爬片 1 46/49 51/53 49/52 47/4995.0633±1.0226爬片 2 45/47 52/55 50/53 46/4895.1158±0.6779爬片 3 47/51 46/47 45/46 55/5796.0866±2.3357爬片 4 44/45 55/57 39/41 42/4396.7663±1.0756爬片 5 39/40 55/57 48/49 40/4296.7971±1.0451爬片 6 37/39 46/47 50/51 52/5397.2241±1.3609x±SD（%）96.1755±1.6293

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Adult neural stem cell dysfunction in the subventricular zone of the lateral ventricle leads to diabetic olfactory defects[J]. Yu-hong Jing,Chu-chu Qi,Li Yuan,Xiang-wen Liu,Li-ping Gao,Jie Yin.  Neural Regeneration Research. 2017(07)
[2]脂肪來源成體干細胞分化為內(nèi)皮細胞的潛能[J]. 曹瑩,孟艷,孫昭,廖聯(lián)明,韓欽,李靜,劉艷寧,趙春華.  中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報. 2005(06)



本文編號：3461605