人胱抑素C（HCC）在體液中的可溶-聚集狀態(tài)變化與多種腦血管病及阿爾茨海默病密切相關(guān),其原因主要由于其第68位亮氨酸殘基突變?yōu)楣劝彼岷笮纬蒐68Q突變體的成淀粉樣纖維的能力增強(qiáng)有直接關(guān)系。由于在人體內(nèi)HCC處于與多種離子共存的狀態(tài)。研究不同的鹽離子對(duì)胱抑素聚集的影響將為研究HCC聚集特性及其在體內(nèi)聚集部位和引發(fā)聚集的特定條件提供必要的信息及相關(guān)線索。由于雞胱抑素（chicken cystatin,cC）單體比較穩(wěn)定,在結(jié)構(gòu)上與HCC有較高的相似性,并且其突變體I66Q與HCC突變體L68Q相對(duì)應(yīng),所以本文采用cC突變體I66Q為模型進(jìn)行研究。本研究通過在cC突變體I66Q的畢赤酵母液體培養(yǎng)基中添加不同的鈉鹽離子,應(yīng)用SDS-PAGE及蛋白質(zhì)免疫印跡方法,研究了不同鹽下胱抑素I66Q突變體聚集情況。并結(jié)合分子動(dòng)力學(xué)進(jìn)行有關(guān)分子機(jī)制的探討。本研究發(fā)現(xiàn),在所選 NaCl、NaBr、NaF、NaI、NaH₂PO₄、NaNO₃、CH₃COONa七種鈉鹽中,在0.1M濃度下除了 NaF、CH₃

【文章來源】：遼寧大學(xué)遼寧省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１畢赤酵母在含有不同濃度磷酸二氫鈉ＹＰＤ豐富培養(yǎng)基中的生Ｌ＜：曲線（Ａ）及誘導(dǎo)培??

Ｔｉｍｅ（ｈ）??（Ｂ）??圖２－１畢赤酵母在含有不同濃度磷酸二氫鈉ＹＰＤ豐富培養(yǎng)基中的生Ｌ＜：曲線（Ａ）及誘導(dǎo)培??養(yǎng)基中具體生長(zhǎng)情況（Ｂ）??表２－３?ＹＰＭ培養(yǎng)基在培養(yǎng)前后ｐＨ值的變化情況??條?培養(yǎng)基?＋?ＮａＨ２Ｐ〇４?（ｍｏｌ／Ｌ）??牛????ｐＨ?０?０．０５?０．１?０．２?０．３?０．４?０．５??培養(yǎng)基（前，ＹＰＭ）?５．４９?５．２１?５．０１?４．８８?４．７５?４．６３?４．５６??培養(yǎng)基（后，ＹＰＭ）?４．４６?４．４９?４．５１?４．２５?４．７２?４．６１?４．５４??２．?４?２不同濃度ＮａＨ２Ｐ０４下胞外胱抑素聚集情況??為確定ＮａＨ２Ｐ０４對(duì)雞胱抑素聚集情況影響是否為濃度相關(guān)，我們通過在誘??導(dǎo)培養(yǎng)基中加入濃度梯度為〇．〇５?Ｍ，?０．１?Ｍ，０．２?Ｍ，０．３?Ｍ，?０．４?Ｍ，０．５?Ｍ的??ＮａＨ２Ｐ０４，誘導(dǎo)表達(dá)三天后，比較胱抑素單倍體、寡聚體和多聚體及不溶物變化??情況。由圖三可以看出，隨著濃度的增高，多聚體及不溶物圖２－２?（Ａ）與對(duì)照??組相比并無明顯差異；寡聚體圖２－２?（Ｂ）則隨著ＮａＨ２Ｐ０４濃度的增高而增高，??并且是依賴于ＮａＨ２Ｐ０４濃度的增高而增多；而單倍體圖２－２（Ｃ）則隨著ＮａＨ２Ｐ０４??２４??

０．０５Ｍ?ＤＩＭ?０２Ｍ?０．３Ｍ?０．４Ｍ?０．５Ｍ??（Ｄ）??圖２－２不同濃度ＮａＨ２Ｐ０４對(duì)胞外胱抑素聚集的影響。??（Ａ）?１０％鹽析為不溶物及多聚體部分；（Ｂ）?４５％鹽析寡聚體部分；（Ｃ）?６０％鹽析為單體??部分；（Ｄ）量化的柱狀圖：泳道１：對(duì)照；泳道２－７分別為：０．０５Ｍ、０．１Ｍ、０．２Ｍ、０．３Ｍ、??０．４Ｍ、０．５ＭＮａＨ２ＰＯ４終濃度的樣品。??２．?４．３不同濃度ＮａＨ２Ｐ０４存在的培養(yǎng)基中畢赤酵母胞內(nèi)胱抑素聚集情況??由于ＮａＨ２Ｐ０４在溶液中為可溶離子，可以自由擴(kuò)散和協(xié)助擴(kuò)散進(jìn)入酵母細(xì)??胞，為了去除ＮａＨ２Ｐ０４對(duì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成與分泌的影響，我們進(jìn)一步研究胞內(nèi)??胱抑素單倍體和二倍體含量隨著ＮａＨ２Ｐ０４濃度升高的變化情況。應(yīng)用蛋白質(zhì)免??２６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]二硫鍵和巰基在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能中的作用及分析方法[J]. 田悅,杜軍保.  實(shí)用兒科臨床雜志. 2007(19)



本文編號(hào)：3458746