發(fā)布時(shí)間：2017-05-03 01:05

  本文關(guān)鍵詞：Nurr1基因?qū)ι窠?jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：體外觀察Nurr1基因過(guò)表達(dá)對(duì)SD大鼠中腦神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化情況的影響。方法：1.通過(guò)全基因合成的方法克隆出大鼠Nurr1基因,通過(guò)限制性內(nèi)切酶酶切后連接到質(zhì)粒載體pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV上,經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化、篩選和鑒定等步驟構(gòu)建pCDH-Nurr1真核表達(dá)載體。2.取孕14天SD胎鼠的中腦組織,分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,在無(wú)血清培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng),取P2代神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行其胚胎源性及分化潛能的免疫熒光鑒定。3.將培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞分成自然分化組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒載體pCDH組、轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒載體pCDH-Nurr1組進(jìn)行試驗(yàn)研究。應(yīng)用Western blot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的方法檢測(cè)TH、DAT多巴胺能神經(jīng)元特異性標(biāo)記物的表達(dá)。結(jié)果：1.成功構(gòu)建了SD大鼠重組質(zhì)粒載體pCDH-Nurr1。2.從孕14天SD胎鼠的中腦組織分離出的神經(jīng)干細(xì)胞能穩(wěn)定增殖并連續(xù)傳代,免疫熒光鑒定Nestin為陽(yáng)性,細(xì)胞分化后鑒定GFAP也都呈陽(yáng)性,證明培養(yǎng)的細(xì)胞是神經(jīng)干細(xì)胞并具有分化能力。3.熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染的情況,基因轉(zhuǎn)染24h,pCDH轉(zhuǎn)染組和重組質(zhì)粒pCDH-Nurr1轉(zhuǎn)染組的大多數(shù)細(xì)胞呈copGFP陽(yáng)性表達(dá),而自然分化組的細(xì)胞則無(wú)熒光蛋白表達(dá)。轉(zhuǎn)染48h左右,熒光蛋白表達(dá)達(dá)到高峰,質(zhì)粒pCDH轉(zhuǎn)染組和pCDH-Nurr1轉(zhuǎn)染組的轉(zhuǎn)染效率分別為34.3%和36.5%,兩組間無(wú)顯著差異。4. Western blot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的方法結(jié)果分析顯示：TH、DAT的表達(dá)情況,自然分化組、pCDH組差別不大,pCDH-Nurr1轉(zhuǎn)染組較自然分化組、pCDH組表達(dá)量明顯升高。結(jié)論：Nurr1基因的過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化,為進(jìn)一步進(jìn)行PD的體內(nèi)細(xì)胞移植治療提供了一定的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：Nurr1基因 神經(jīng)干細(xì)胞 多巴胺能神經(jīng)元 分化
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 本文常用縮略詞10-12
• 前言12-15
• 材料和方法15-29
• 一、材料15-19
• 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及質(zhì)粒載體15
• 2.主要儀器15-16
• 3.主要試劑16-17
• 4.主要試劑的配制17-19
• 二、方法19-29
• 第一部分 表達(dá)載體的構(gòu)建19-23
• 1. PCR擴(kuò)X椖康幕
  
  本文編號(hào)：342021
  suoshi