本文關鍵詞：Nurr1基因?qū)ι窠?jīng)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元分化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：體外觀察Nurr1基因過表達對SD大鼠中腦神經(jīng)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元分化情況的影響。方法：1.通過全基因合成的方法克隆出大鼠Nurr1基因,通過限制性內(nèi)切酶酶切后連接到質(zhì)粒載體pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV上,經(jīng)過轉(zhuǎn)化、篩選和鑒定等步驟構(gòu)建pCDH-Nurr1真核表達載體。2.取孕14天SD胎鼠的中腦組織,分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞,在無血清培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng),取P2代神經(jīng)干細胞進行其胚胎源性及分化潛能的免疫熒光鑒定。3.將培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞分成自然分化組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒載體pCDH組、轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒載體pCDH-Nurr1組進行試驗研究。應用Western blot、實時熒光定量PCR、免疫熒光細胞化學的方法檢測TH、DAT多巴胺能神經(jīng)元特異性標記物的表達。結(jié)果：1.成功構(gòu)建了SD大鼠重組質(zhì)粒載體pCDH-Nurr1。2.從孕14天SD胎鼠的中腦組織分離出的神經(jīng)干細胞能穩(wěn)定增殖并連續(xù)傳代,免疫熒光鑒定Nestin為陽性,細胞分化后鑒定GFAP也都呈陽性,證明培養(yǎng)的細胞是神經(jīng)干細胞并具有分化能力。3.熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染的情況,基因轉(zhuǎn)染24h,pCDH轉(zhuǎn)染組和重組質(zhì)粒pCDH-Nurr1轉(zhuǎn)染組的大多數(shù)細胞呈copGFP陽性表達,而自然分化組的細胞則無熒光蛋白表達。轉(zhuǎn)染48h左右,熒光蛋白表達達到高峰,質(zhì)粒pCDH轉(zhuǎn)染組和pCDH-Nurr1轉(zhuǎn)染組的轉(zhuǎn)染效率分別為34.3%和36.5%,兩組間無顯著差異。4. Western blot、實時熒光定量PCR、免疫熒光細胞化學的方法結(jié)果分析顯示：TH、DAT的表達情況,自然分化組、pCDH組差別不大,pCDH-Nurr1轉(zhuǎn)染組較自然分化組、pCDH組表達量明顯升高。結(jié)論：Nurr1基因的過表達能夠促進神經(jīng)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元分化,為進一步進行PD的體內(nèi)細胞移植治療提供了一定的理論依據(jù)。
【關鍵詞】：Nurr1基因 神經(jīng)干細胞 多巴胺能神經(jīng)元 分化
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 本文常用縮略詞10-12
• 前言12-15
• 材料和方法15-29
• 一、材料15-19
• 1.實驗動物及質(zhì)粒載體15
• 2.主要儀器15-16
• 3.主要試劑16-17
• 4.主要試劑的配制17-19
• 二、方法19-29
• 第一部分 表達載體的構(gòu)建19-23
• 1. PCR擴X椖康幕
  
  本文編號：342021
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