發(fā)布時間：2017-05-03 07:14

  本文關鍵詞：脊髓背角HCN通道在神經(jīng)病理性疼痛中的作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：外周神經(jīng)損傷后造成的神經(jīng)病理性疼痛是臨床上多見而難以治療的慢性疾痛,對人們的身體健康造成嚴重影響。因此,揭示其發(fā)生機制、進一步研發(fā)效果良好而副作用小的鎮(zhèn)痛藥物是疼痛研究領域的熱點。以往研究表明,外周神經(jīng)損傷引起的背根神經(jīng)節(jié)和脊髓背角神經(jīng)元興奮性增高是產(chǎn)生神經(jīng)病理性疼痛的關鍵。脊髓背角是痛覺傳導過程中重要的整合中樞,新近研究發(fā)現(xiàn),分布于脊髓背角的超極化激活環(huán)核苷酸門控(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide gated,HCN)通道在病理性疼痛的調節(jié)起重要作用,但其機制不清楚。此外,嘌呤能P2X受體與疼痛密切相關,研究表明表達于脊髓背角神經(jīng)元的P2X受體的激活促進了病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展。HCN通道與P2X受體均表達于脊髓背角神經(jīng)元,那么,HCN通道是否通過影響背角神經(jīng)元P2X受體的功能,進一步調節(jié)神經(jīng)元的興奮性及傷害性信息的傳遞,目前尚不清楚。本課題通過制作大鼠坐骨神經(jīng)痛模型,結合在體和離體研究,綜合應用行為學、分子生物學等方法,從以下幾個方面進行觀察:1)HCN通道在坐骨神經(jīng)縮窄性損傷(chronic constriction injury,CCI)所引起的神經(jīng)痛中的作用;2)HCN通道是否調節(jié)CCI大鼠脊髓背角神經(jīng)元P2X受體的表達;3)HCN通道對培養(yǎng)的脊髓背角神經(jīng)元P2X受體功能的影響。本課題從不同角度探討HCN通道在神經(jīng)病理性疼痛中的作用及相關機制,為開發(fā)以HCN通道為靶點的新型鎮(zhèn)痛藥提供理論基礎。目的:1.觀察脊髓背角神經(jīng)元HCN通道在神經(jīng)病理性疼痛中的作用;2.觀察HCN通道對培養(yǎng)的脊髓背角神經(jīng)元P2X受體功能的調節(jié)作用及機制。方法:1.在體實驗:7~8周齡成年SD大鼠(雄性)48只隨機分為6組:(1)sham組(假手術組)、(2)CCI組(鞘內注射生理鹽水)、(3)~(6)CCI+ZD7288(鞘內分別注射1,10,30,50μg ZD7288),每組8只。CCI及CCI+ZD7288組大鼠在鞘內置管恢復5d后給予CCI術,術后鞘內給藥(2次/日,持續(xù)14d);sham組大鼠不進行鞘內置管,僅游離坐骨神經(jīng),不結扎。行為學檢測:熱痛閾測定;免疫印跡技術檢測:脊髓背角HCN1,3,4通道、P2X2,6受體、P-PKA蛋白表達水平;2.離體實驗:培養(yǎng)出生三天以內的SD乳鼠脊髓背角神經(jīng)元,分為7組:①對照組;②ATP組(100μmol/L);③無鈣液+ATP組,無鈣液預先孵育20min,再加入ATP;④TNP-ATP(10μmol/L)+ATP組,TNP-ATP預先孵育10min,再加入ATP;⑤ZD7288(1,10,100,1000umol/L)+ATP組,不同濃度ZD7288先孵育10min,再加ATP;⑥8-Br-cAMP(100μmol/L)+ATP組;⑦ZD7288(100μmol/L)+8-Br-cAMP(100μmol/L)+ATP組,先加ZD7288孵育10min,再加cAMP孵育10min,最后加ATP。運用激光共聚焦顯微鏡技術觀察神經(jīng)元[Ca2+]i的動態(tài)變化。結果:1.大鼠CCI術后即第1d即形成穩(wěn)定的熱痛敏,至第14d熱痛敏仍持續(xù)存在,TWL明顯縮短(P0.05);鞘內給予30μg HCN通道阻滯劑ZD7288可明顯延長CCI大鼠的TWL(P0.05)。Western Blot結果顯示,CCI組大鼠在術后7、14 d術側脊髓背角HCN1,3,4、P2X2,6及P-PKA表達顯著增加(P0.05);鞘內給予ZD7288可顯著降低CCI大鼠HCN1,3,4,P2X2,6及P-PKA的表達(P0.05)。2.ATP(100μmol/L)可導致脊髓背角神經(jīng)元[Ca2+]i升高,是由P2X受體介導的細胞外Ca2+內流所致(P0.05);HCN通道拮抗劑ZD7288(10-1000μmol/L,預孵育10min)可抑制ATP(100μmol/L)引起的脊髓背角神經(jīng)元[Ca2+]i增高,且呈現(xiàn)劑量依賴性;8-Br-cAMP(cAMP類似物,100μmol/L)可增強ATP引起的脊髓背角神經(jīng)元[Ca2+]i升高,ZD7288(預孵育10min)可顯著抑制8-Br-cAMP的效應(P0.05)。結論:1.脊髓背角HCN通道的激活可促進CCI所致的神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生與維持;同時,神經(jīng)痛時脊髓背角HCN通道的激活可促進嘌呤能P2X受體的表達。2.HCN通道拮抗劑ZD7288顯著抑制脊髓背角神經(jīng)元P2X受體誘發(fā)的[Ca2+]i升高,說明脊髓背角神經(jīng)元HCN通道可促進嘌呤能P2X受體的功能。
【關鍵詞】：神經(jīng)病理性疼痛 脊髓 神經(jīng)元 HCN通道 P2X受體 [Ca~(2+)]i
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R741
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 技術路線13-14
• 第一部分 脊髓背角HCN通道在神經(jīng)病理性疼痛中的作用14-29
• 材料與方法15-19
• 結果19-23
• 討論23-25
• 參考文獻25-29
• 第二部分 HCN 通道對培養(yǎng)的脊髓背角神經(jīng)元 ATP/P2X 受體的調節(jié)作用29-45
• 材料與方法31-34
• 結果34-41
• 討論41-43
• 參考文獻43-45
• 綜述45-55
• 參考文獻51-55
• 致謝55-56
• 作者簡介56

【參考文獻】

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1 叢麗娜;張傳林;陳夢潔;馬克濤;李麗;司軍強;;GABA_A受體亞基在神經(jīng)病理性痛大鼠DRG神經(jīng)元的表達[J];神經(jīng)解剖學雜志;2014年02期

2 趙U

本文編號：342535