帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一種常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,主要病理改變是中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的丟失,殘存神經(jīng)元內(nèi)α-突觸核蛋白（α-synuclein,α-Syn）聚集形成路易小體,同時(shí)伴有鐵在黑質(zhì)的特異性聚積。硝化應(yīng)激可引發(fā)多種蛋白質(zhì),如parkin蛋白等,發(fā)生亞硝基化（S-nitrosylation,SNO）,參與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生及進(jìn)展。Parkin是一種E3泛素連接酶,介導(dǎo)了鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1（divalent metal transporter 1,DMT1）的泛素化降解。本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)DMT1蛋白水平的高表達(dá)是黑質(zhì)鐵聚集的重要原因之一,但對(duì)其調(diào)控機(jī)制尚不清楚。由于硝化應(yīng)激是PD中較為常見(jiàn)的病理表現(xiàn),因此,深入探討parkin蛋白的亞硝基化修飾對(duì)DMT1的調(diào)控及其機(jī)制,對(duì)闡明PD中黑質(zhì)鐵聚集的原因具有重要意義。本研究首先在SH-SY5Y細(xì)胞上,觀察了給予一氧化氮（nitric oxide,NO）供體亞硝基谷胱甘肽（nitrosoglutathione,GSNO）處理后,細(xì)胞NO水平、SNO-parkin和DMT1蛋白表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

GSNO對(duì)過(guò)表達(dá)parkin的SH-SY5Y細(xì)胞DMT1蛋白水平的影響

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文驗(yàn)。在某些病理狀態(tài)下體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生過(guò)量的 NO，引發(fā)多種蛋白質(zhì)巰基發(fā)生亞硝基化。由于細(xì)胞內(nèi) NO 可迅速轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽（NO2）和硝酸鹽（NO3），因此可用測(cè)量亞硝酸鹽和硝酸鹽的總濃度來(lái)計(jì)算 NO 水平的產(chǎn)生。如圖 3B 所示，parkin-GSNO 組被氧化的 NO（NO2+NO3）水平升高了 46.5%，與 parkin-GSH 組相比，差別具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01。Parkin-MPP+組被氧化的 NO（NO2+NO3）水平升高了 60.2%，與 parkin-NS 組相比，差別具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。Parkin-MPP+處理組與parkin-GSNO 處理組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。給予 NOS 抑制劑 L-NNA預(yù)處理后，再給予 MPP+處理，被氧化的 NO（NO2+NO3）水平降低了 35.1%，與parkin-MPP+組相比，差別具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。以上結(jié)果表明，MPP+與 GSNO 處理細(xì)胞均可產(chǎn)生硝化應(yīng)激，可升高被氧化的 NO（NO2+NO3）水平。

圖 4 MPP+對(duì)過(guò)表達(dá) parkin 的 SH-SY5Y 細(xì)胞 DMT1 蛋白水平的影響Fig.4 Effect of MPP+on DMT1 levels in parkin-overexpressed SH-SY5Y cellsA. The levels of SNO-parkin and DMT1 were increased in SH-SY5Y cells treated with200 μM MPP+for 24 hrs. L-NNA inhibited the S-nitrosylation of parkin and the increasedDMT1 levels in these cells. B. Statistical analysis of changes in SNO-parkin levels. Datawere presented as the ratio of SNO-parkin/parkin. C. Statistical analysis of changes inDMT1 levels. Data were presented as the ratio of DMT1 to β-actin. D. Cells viabilityfollowing GSNO or MPP+treatment was determined by MTT assay. All data werepresented as mean ±SEM of 6 independent experiments.***P<0.001, compared with theparkin-GSH group;^^P<0.01,^^^P<0.001, compared with the parkin-NS group;##P<0.01,###P<0.001, compared with the parkin-MPP+groups. N= 3.5. Parkin 的亞硝基化修飾可增強(qiáng) SH-SY5Y 細(xì)胞的攝鐵能力我們進(jìn)一步觀察了 SH-SY5Y 細(xì)胞中 parkin 發(fā)生亞硝基化修飾對(duì)鐵攝取功能的影響。如圖 5 所示，parkin-GSNO 組和 parkin-MPP+組的熒光強(qiáng)度顯著降低，與對(duì)照


本文編號(hào)：3419317