近期有研究表明,線粒體分裂融合途徑在缺血性神經(jīng)元的損傷中扮演重要角色。我們的前期研究結(jié)果也表明,在缺血性刺激后,神經(jīng)元內(nèi)線粒體存在明顯的過度斷裂現(xiàn)象。而PINK1作為家族性帕金森病的致病基因,目前已有較多文獻報導(dǎo)其參與了線粒體的分裂和融合過程,在哺乳動物細胞內(nèi),PINK1（PTEN-induced putative kinase1）基因敲除可以誘導(dǎo)線粒體分裂以及片段化。為了探索PINK1在缺血性神經(jīng)損傷中的作用,及其對缺血后神經(jīng)元線粒體功能的影響。我們制備了氧糖剝奪（OGD）損傷的神經(jīng)元模型,并采用慢病毒表達體系過表達野生型PINK1或其突變型L347p和W437x。并采用慢病毒介導(dǎo)的Pinkl-shRNA抑制內(nèi)源性Pink1的表達。研究結(jié)果表明,PINKl能夠明顯減少改善OGD誘導(dǎo)細胞死亡、改善OGD后線粒體的形態(tài)和功能、減輕OGD后線粒體膜電位的衰減和能量代謝障礙。其保護作用可能是通過PINK1抑制了OGD誘導(dǎo)的線粒體分裂蛋白Drp1從胞漿向線粒體的細胞內(nèi)轉(zhuǎn)位,從而重建了線粒體分裂和融合的平衡有關(guān)。研究提示,PINK1可以通過抑制缺血性損傷誘導(dǎo)的線粒體分裂,從而達到改善線粒體功能和... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

神經(jīng)元鑒定免疫組化圖

對細胞核進行染色，以GFP陽性細胞占Hochest 33342染色細胞的比例來進行細胞感染率鑒定。結(jié)果顯示，90%以上的細胞被慢病毒所感染(圖1-2A、B)。22

圖1-3 PINKl過表達慢病毒載體表達A： Western Blot檢測慢病毒感染后PIMCl蛋白表達 B: q-PCR對PINK1的mRNA檢測，慢病毒感染細胞后，細胞PINK1 mRNA達水平顯著提高，與對照相比，mRNA的表達水平上升了 5倍2.3 Pinkl -shRNA慢病毒載體的構(gòu)建和表達原代神經(jīng)元培養(yǎng)7-10天后，采用包含有Pinkl-shRNA質(zhì)粒的慢病毒載體感染細胞，并采用含有不與任何基因序列有相互作用的Scramble—ShRNA作為對照。在細胞感染后48h，抽取細胞總RNA，q-PCR對細胞Pinkl的mRNA水平進行檢測。結(jié)果提示，與Scramble-shRNA組相比，Pinkl-shRNA能夠顯著降低內(nèi)源性Pinkl的表達，其抑制效果大于80% (圖1-4)。< 0.005-1

【參考文獻】：
期刊論文
[1]PINK1基因突變增強帕金森病相關(guān)毒物神經(jīng)毒性作用的線粒體機制[J]. 方堃,董強,崔梅.  神經(jīng)損傷與功能重建. 2012(03)



本文編號：3415035