[背景和目的]腦缺血再灌注后會釋放大量活性氧（ROS）。ROS引起的氧化應(yīng)激損傷在缺血性腦卒中疾病進展中發(fā)揮重要作用。氧化還原失衡與急性缺血性腦卒中臨床轉(zhuǎn)歸相關(guān),但潛在的機制尚不明確。因此,更好地了解腦缺血再灌注后氧化應(yīng)激損傷可能為尋找缺血性腦卒中治療靶點提供線索。乳腺癌易感蛋白1（BRCA1）參與調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)。過表達乳腺癌細胞BRCA1可促進NRF2及啟動子區(qū)含有抗氧化反應(yīng)元件的基因,如NQO1、GPX3及SDO1的表達,進而減少細胞內(nèi)ROS水平。此外,BRCA1可修復(fù)ROS引起的DNA損傷病灶。BRCA1在海馬區(qū)神經(jīng)元中有表達。BRCA1功能的缺失會導(dǎo)致DNA損傷增多,神經(jīng)突生長受限及認知功能缺損加重。心肌缺血再灌注后,BRCA1的表達上調(diào)。但BRCA1在腦缺血再灌注后早期腦損傷及遠期神經(jīng)功能恢復(fù)中的作用如何,目前尚不清楚。本研究旨在探究BRCA1對腦缺血再灌注損傷轉(zhuǎn)歸的影響并明確具體的作用機制。[方法]分別建立小鼠大腦中動脈栓塞（MCAO）模型及細胞氧糖剝奪再恢復(fù)（OGD/R）模型作為體內(nèi)外缺血性腦卒中研究模型。運用免疫印跡、real-time PCR及免疫熒光技術(shù)觀察BRC... 

【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２?ＢＲＣＡ１蛋白結(jié)構(gòu)１１２２１??

結(jié)果顯示，假手術(shù)小鼠腦組織中ＢＲＣＡ１熒光染色信號較弱，可與神經(jīng)元??標記物ＮｅｕＮ雙標，主要分布于細胞質(zhì)中，未發(fā)現(xiàn)其與小膠質(zhì)細胞標志物丨ｂａｌ??及星型膠質(zhì)細胞標志物ＧＦＡＰ雙標（圖２．２）。??＿＿＿＿??Ｉｂａ１?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ???■■■■??ｍｍｍｕ??圖２．２假手術(shù)小鼠腦組織中ＢＲＣＡ１表達分布。比例尺：??２．４．２?＼ｌＣＡＯ小鼠腦組織中ＢＫＣＡ１細胞定位及表達變化??接著，我們對ＭＣＡＯ小歐腦組織切片進行免疫雙染，發(fā)現(xiàn)造模后Ｉｄ梗死灶??邊緣區(qū)，神經(jīng)元ＢＲＣＡ１染色信號較假手術(shù)小鼠明顯升高，細胞核及細胞質(zhì)均有??分布（圖２．３Ａ）。ＢＲＣＡＩ可與神經(jīng)元標志物ＮｅｕＮ雙標，未發(fā)現(xiàn)其與小膠質(zhì)細胞??標志物Ｉｂａｌ及星型膠質(zhì)細胞標志物ＧＦＡＰ雙標（圖２．３Ｂ），與在假手術(shù)小鼠腦組??織中觀察的結(jié)果一致。ＭＣＡＯ后升高的ＢＲＣＡ１丨？：要分布于梗死灶．邊終Ｋ皮？神??經(jīng)元上，而在紋狀體區(qū)及海馬ＣＡ１區(qū)神經(jīng)元丨：未見明顯升高（圖２．３Ａ）。免疫??印跡實驗（ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ，?ＷＢ）觀察ＭＣＡＯ后ＢＲＣＡ１蛋白表達模式，發(fā)現(xiàn)梗死??灶邊緣區(qū)ＢＲＣ’Ａｌ蛋白表達呈先升高后降低趨勢

??至基礎(chǔ)水平（圖２．４Ａ）。而梗死灶核心區(qū)ＢＲＣＡ１表達呈…過性升高，再灌注后??２ｈ達高峰（假手術(shù)組的１．９５±０．５６倍），再灌注后６ｈ恢復(fù)至基礎(chǔ)水平（圖２．４Ｂ）。??Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ實驗證實ＢＲＣＡ１?ｍＲＮＡ表達趨勢與蛋白表達模式基本一致（圖??２．５Ａ?和?Ｂ）??Ａ?Ｉｐｓｉｌａｔｅｒａｌ?（ｌ／Ｒ?１ｄ）??ＮｅｕＮ?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ??ｍｗａａｍ??■■■■??■■■■??Ｂ?丨?ｂａ１?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?〇?吻??屬■■■??Ｑ?ＧＦＡＰ?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ??圖２．３?ＭＣＡＯ后ＢＲＣＡｌ細胞定位。（Ａ）?ＭＣＡＯ后Ｉｄ，皮層、紋狀體及海馬ＣＡ１區(qū)ＢＲＣＡ１??與ＮｅｕＮ免疫雙標染色；（Ｂ）?ＭＣＡＯ后Ｉｄ，皮層區(qū)ＢＲＣＡ１與Ｉｂａｌ或ＧＦＡＰ免疫雙標染??色。染色標尺：５０Ｍｍ。??４６??


本文編號：3408615