[背景和目的]腦缺血再灌注后會釋放大量活性氧（ROS）。ROS引起的氧化應激損傷在缺血性腦卒中疾病進展中發(fā)揮重要作用。氧化還原失衡與急性缺血性腦卒中臨床轉歸相關,但潛在的機制尚不明確。因此,更好地了解腦缺血再灌注后氧化應激損傷可能為尋找缺血性腦卒中治療靶點提供線索。乳腺癌易感蛋白1（BRCA1）參與調節(jié)氧化應激反應。過表達乳腺癌細胞BRCA1可促進NRF2及啟動子區(qū)含有抗氧化反應元件的基因,如NQO1、GPX3及SDO1的表達,進而減少細胞內ROS水平。此外,BRCA1可修復ROS引起的DNA損傷病灶。BRCA1在海馬區(qū)神經元中有表達。BRCA1功能的缺失會導致DNA損傷增多,神經突生長受限及認知功能缺損加重。心肌缺血再灌注后,BRCA1的表達上調。但BRCA1在腦缺血再灌注后早期腦損傷及遠期神經功能恢復中的作用如何,目前尚不清楚。本研究旨在探究BRCA1對腦缺血再灌注損傷轉歸的影響并明確具體的作用機制。[方法]分別建立小鼠大腦中動脈栓塞（MCAO）模型及細胞氧糖剝奪再恢復（OGD/R）模型作為體內外缺血性腦卒中研究模型。運用免疫印跡、real-time PCR及免疫熒光技術觀察BRC... 

【文章來源】：南京大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：119 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２?ＢＲＣＡ１蛋白結構１１２２１??

結果顯示，假手術小鼠腦組織中ＢＲＣＡ１熒光染色信號較弱，可與神經元??標記物ＮｅｕＮ雙標，主要分布于細胞質中，未發(fā)現其與小膠質細胞標志物丨ｂａｌ??及星型膠質細胞標志物ＧＦＡＰ雙標（圖２．２）。??＿＿＿＿??Ｉｂａ１?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ???■■■■??ｍｍｍｕ??圖２．２假手術小鼠腦組織中ＢＲＣＡ１表達分布。比例尺：??２．４．２?＼ｌＣＡＯ小鼠腦組織中ＢＫＣＡ１細胞定位及表達變化??接著，我們對ＭＣＡＯ小歐腦組織切片進行免疫雙染，發(fā)現造模后Ｉｄ梗死灶??邊緣區(qū)，神經元ＢＲＣＡ１染色信號較假手術小鼠明顯升高，細胞核及細胞質均有??分布（圖２．３Ａ）。ＢＲＣＡＩ可與神經元標志物ＮｅｕＮ雙標，未發(fā)現其與小膠質細胞??標志物Ｉｂａｌ及星型膠質細胞標志物ＧＦＡＰ雙標（圖２．３Ｂ），與在假手術小鼠腦組??織中觀察的結果一致。ＭＣＡＯ后升高的ＢＲＣＡ１丨？：要分布于梗死灶．邊終Ｋ皮？神??經元上，而在紋狀體區(qū)及海馬ＣＡ１區(qū)神經元丨：未見明顯升高（圖２．３Ａ）。免疫??印跡實驗（ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ，?ＷＢ）觀察ＭＣＡＯ后ＢＲＣＡ１蛋白表達模式，發(fā)現梗死??灶邊緣區(qū)ＢＲＣ’Ａｌ蛋白表達呈先升高后降低趨勢

??至基礎水平（圖２．４Ａ）。而梗死灶核心區(qū)ＢＲＣＡ１表達呈…過性升高，再灌注后??２ｈ達高峰（假手術組的１．９５±０．５６倍），再灌注后６ｈ恢復至基礎水平（圖２．４Ｂ）。??Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ實驗證實ＢＲＣＡ１?ｍＲＮＡ表達趨勢與蛋白表達模式基本一致（圖??２．５Ａ?和?Ｂ）??Ａ?Ｉｐｓｉｌａｔｅｒａｌ?（ｌ／Ｒ?１ｄ）??ＮｅｕＮ?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ??ｍｗａａｍ??■■■■??■■■■??Ｂ?丨?ｂａ１?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?〇?吻??屬■■■??Ｑ?ＧＦＡＰ?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ??圖２．３?ＭＣＡＯ后ＢＲＣＡｌ細胞定位。（Ａ）?ＭＣＡＯ后Ｉｄ，皮層、紋狀體及海馬ＣＡ１區(qū)ＢＲＣＡ１??與ＮｅｕＮ免疫雙標染色；（Ｂ）?ＭＣＡＯ后Ｉｄ，皮層區(qū)ＢＲＣＡ１與Ｉｂａｌ或ＧＦＡＰ免疫雙標染??色。染色標尺：５０Ｍｍ。??４６??


本文編號：3408615