發(fā)布時(shí)間：2017-05-01 20:02

  本文關(guān)鍵詞：帕金森病患者血漿外泌體的分離鑒定及miRNA表達(dá)譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:microRNA(miRNA)是一種小的非編碼RNA,通過(guò)促進(jìn)靶mRNA降解或抑制其翻譯起到轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用,近年來(lái)有研究報(bào)道m(xù)iRNA參與帕金森病(Parkinson's disease,PD)的發(fā)生發(fā)展,且某些差異表達(dá)的miRNA有助于PD的診斷。目的:對(duì)比分析PD患者與對(duì)照者血漿外泌體中的miRNA,并進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)及KEGG通路分析,以尋找出有意義的miRNA。方法:1、分別收集13例散發(fā)性PD患者及與其年齡性別相匹配的健康對(duì)照者的血漿樣本。2、用Invitrogen試劑盒從血漿中分離外泌體,通過(guò)q Nano測(cè)定濃度及大小分布,Western blot檢測(cè)外泌體標(biāo)記蛋白CD63、Alix的表達(dá)以對(duì)其進(jìn)行鑒定。3、使用高通道測(cè)序檢測(cè)兩組血漿外泌體miRNA的表達(dá)差異。4、使用miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件對(duì)mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),并對(duì)預(yù)測(cè)的靶基因進(jìn)行KEGG通路分析。結(jié)果:1、從血漿中分離出mode直徑100nm、表達(dá)外泌體標(biāo)記蛋白CD63和Alix的粒子,鑒定為外泌體。2、在表達(dá)明顯差異(Ratio2.0,P0.05)的miRNA中,與對(duì)照組相比,PD組以上調(diào)為主(65.3%)。3、mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195預(yù)測(cè)的靶基因均參與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子信號(hào)通路。結(jié)論:1、本研究成功分離并鑒定了血漿外泌體。2、血漿外泌體mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195有望作為PD的生物標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 外泌體 血漿 微小RNA
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料與方法12-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 2.1.1 主要試劑與材料12-13
• 2.1.2 主要儀器13-14
• 2.1.3 主要試劑的配制14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法14-23
• 2.2.1 研究對(duì)象14-15
• 2.2.2 血漿樣品收集15
• 2.2.3 血漿外泌體分離15-16
• 2.2.4 qNano分析血漿外泌體的濃度和大小分布16
• 2.2.5 Western blot鑒定血漿外泌體的標(biāo)志蛋白16-18
• 2.2.6 血漿外泌體的RNA提取及濃度測(cè)定18-19
• 2.2.7 文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序19-22
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 第3章 結(jié)果23-28
• 3.1 外泌體的鑒定23-24
• 3.2 外泌體RNA濃度測(cè)定24
• 3.3 外泌體miRNA測(cè)序結(jié)果分析24-28
• 3.3.1 樣本測(cè)序結(jié)果的基本情況24
• 3.3.2 兩組共表達(dá)及特異表達(dá)的外泌體miRNA24-25
• 3.3.3 兩組外泌體miRNA的表達(dá)差異分析25-26
• 3.3.4 靶基因預(yù)測(cè)26
• 3.3.5 KEGG通路分析26-28
• 第4章 討論28-30
• 第5章 結(jié)論與展望30-31
• 致謝31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果35-36
• 綜述36-42
• 參考文獻(xiàn)40-42

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