MRI引導(dǎo)聚焦超聲聯(lián)合載基因微泡靶向開放血腦屏障促進(jìn)外源基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染
發(fā)布時(shí)間：2021-08-30 19:11
第一部分MRI引導(dǎo)聚焦超聲靶向可逆開放小鼠BBB目的建立MRI引導(dǎo)超聲靶向微泡破裂（ultrasound-targeted microbubbledestruction，UTMD）開放小鼠血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）的模型，并為后續(xù)MRI引導(dǎo)UTMD介導(dǎo)基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染篩選出最優(yōu)的超聲參數(shù)。方法將15只昆明小鼠隨機(jī)分成三組，分布接受MRI引導(dǎo)1.1MHz聚焦超聲聯(lián)合微泡以1.1W、2.2W、4.4W不同強(qiáng)度輻照小鼠腦部40s，通過靶點(diǎn)MRI增強(qiáng)掃描、伊文氏藍(lán)（EB）染色和HE組織學(xué)檢查了解不同超聲強(qiáng)度下BBB開放的程度、24h后恢復(fù)狀態(tài)和組織學(xué)變化，篩選出對腦組織影響最小的超聲參數(shù)。結(jié)果1．MRI增強(qiáng)掃描圖像：在超聲輻照結(jié)束當(dāng)時(shí)及24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)對鼠腦行增強(qiáng)掃描，結(jié)果顯示：聲功率1.1W組在兩時(shí)間點(diǎn)均無增強(qiáng)；2.2W組在超聲輻照后靶區(qū)當(dāng)即出現(xiàn)明顯的小范圍增強(qiáng)，在24h后已未見增強(qiáng)；4.4W組在超聲輻照后靶區(qū)出現(xiàn)明顯的大范圍增強(qiáng)，且24h后仍可在該區(qū)域見片狀增強(qiáng)信號，但范圍有所減小。2．EB染色：超聲輻照后立即行EB染色，聲功率1.1W組靶區(qū)腦組織未見藍(lán)染，2....
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：92 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
MRI引導(dǎo)UTMD輻照鼠腦示意圖
各組的腦組織均只能看到藍(lán)染的細(xì)胞功實(shí)現(xiàn)外源基因 EGFP 在腦內(nèi)的表達(dá)檢測 EGFP 表達(dá)部位EGFP 在腦組織內(nèi)的表達(dá)部位，我們采異性標(biāo)記物 β-Tubulin III 的分布關(guān)系共區(qū)域化（見附圖 5），表明超聲聯(lián)胞漿內(nèi)表達(dá)。測定RNA的OD260／280比值在1.8-2.凝膠電泳結(jié)果見28S，18S兩條帶清晰PCR的要求(見圖 2)。
圖 3 RT-PCR 檢測各組 EGFP mRNA 的含量（A 示根據(jù)處理因素的不同分為對照組（Con 組）、質(zhì)粒組（P 組）、質(zhì)粒＋微泡組（P+M組）、質(zhì)粒＋超聲組（P+U 組）、質(zhì)粒＋超聲＋微泡組（P+U+M 組），B 為根據(jù)觀察時(shí)間點(diǎn)的不同，分為 0 h/ 6 h/ 12 h/ 24 h/ 48 h/ 5 d/ 7 d/ 14 d/ 28 d 組）Fig.3 Use of Real-time PCR to investigate the changes of EGFP mRNA expression (relative toGAPDH mRNA).(A) EGFP mRNA expression in brain of different treatment groups. Con: control group; P:Plasmid group; P+M: Plasmid + microbubble group; P+U: Plasmid + US group; P+U+M:Plasmid + US + microbubble group. **P < 0.01 compared to Con, P, P+M, P+U group. (B)EGFP mRNA expression in brain of P+U+M group at 0 h, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 5 d, 7 d, 14 dand 28 d after transfection,**P < 0.01 compared to 0 h, 6 h, 12 h, 24 h, 5 d, 7 d, 14 d and 28 dgroup.（n=5）2.6 Western blot 檢測各組 EGFP 蛋白的表達(dá)情況
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MRI引導(dǎo)與監(jiān)測聚焦超聲靶向開放血腦屏障兔腦給藥[J]. 梅杰,程遠(yuǎn),宋彧,楊延慶,汪峰,王智彪,劉映江. 中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù). 2009(02)
[2]MR溫度圖及信號強(qiáng)度值在超聲開放家兔血腦屏障中的作用[J]. 宋彧,程遠(yuǎn),楊延慶,梅杰,李發(fā)琪,王智彪,劉映江. 激光雜志. 2008(04)
[3]低頻超聲聯(lián)合微泡經(jīng)顱開放血腦屏障初步研究[J]. 程遠(yuǎn),于銳,宋彧,馬穎,陳維福,王志剛. 中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù). 2006(01)
本文編號：3373345
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：92 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
MRI引導(dǎo)UTMD輻照鼠腦示意圖
各組的腦組織均只能看到藍(lán)染的細(xì)胞功實(shí)現(xiàn)外源基因 EGFP 在腦內(nèi)的表達(dá)檢測 EGFP 表達(dá)部位EGFP 在腦組織內(nèi)的表達(dá)部位，我們采異性標(biāo)記物 β-Tubulin III 的分布關(guān)系共區(qū)域化（見附圖 5），表明超聲聯(lián)胞漿內(nèi)表達(dá)。測定RNA的OD260／280比值在1.8-2.凝膠電泳結(jié)果見28S，18S兩條帶清晰PCR的要求(見圖 2)。
圖 3 RT-PCR 檢測各組 EGFP mRNA 的含量（A 示根據(jù)處理因素的不同分為對照組（Con 組）、質(zhì)粒組（P 組）、質(zhì)粒＋微泡組（P+M組）、質(zhì)粒＋超聲組（P+U 組）、質(zhì)粒＋超聲＋微泡組（P+U+M 組），B 為根據(jù)觀察時(shí)間點(diǎn)的不同，分為 0 h/ 6 h/ 12 h/ 24 h/ 48 h/ 5 d/ 7 d/ 14 d/ 28 d 組）Fig.3 Use of Real-time PCR to investigate the changes of EGFP mRNA expression (relative toGAPDH mRNA).(A) EGFP mRNA expression in brain of different treatment groups. Con: control group; P:Plasmid group; P+M: Plasmid + microbubble group; P+U: Plasmid + US group; P+U+M:Plasmid + US + microbubble group. **P < 0.01 compared to Con, P, P+M, P+U group. (B)EGFP mRNA expression in brain of P+U+M group at 0 h, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 5 d, 7 d, 14 dand 28 d after transfection,**P < 0.01 compared to 0 h, 6 h, 12 h, 24 h, 5 d, 7 d, 14 d and 28 dgroup.（n=5）2.6 Western blot 檢測各組 EGFP 蛋白的表達(dá)情況
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MRI引導(dǎo)與監(jiān)測聚焦超聲靶向開放血腦屏障兔腦給藥[J]. 梅杰,程遠(yuǎn),宋彧,楊延慶,汪峰,王智彪,劉映江. 中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù). 2009(02)
[2]MR溫度圖及信號強(qiáng)度值在超聲開放家兔血腦屏障中的作用[J]. 宋彧,程遠(yuǎn),楊延慶,梅杰,李發(fā)琪,王智彪,劉映江. 激光雜志. 2008(04)
[3]低頻超聲聯(lián)合微泡經(jīng)顱開放血腦屏障初步研究[J]. 程遠(yuǎn),于銳,宋彧,馬穎,陳維福,王志剛. 中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù). 2006(01)
本文編號：3373345
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