本文關(guān)鍵詞：SSB、RecG和RecO蛋白在DNA損傷修復(fù)中作用關(guān)系的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)病癥與三核苷酸重復(fù)序列(CAG)n(CTG)n不穩(wěn)定性擴(kuò)增有關(guān),其不穩(wěn)定性的分子機(jī)制尚不清楚,但已經(jīng)知道,細(xì)胞內(nèi)多種基因?qū)?CAG)n(CTG)n重復(fù)序列不穩(wěn)定性都有一定的影響。本論文通過構(gòu)建ssb-113、recG、recO相關(guān)基因缺陷菌株,以分析在DNA復(fù)制、重組和損傷修復(fù)中SSB、RecG和RecO蛋白發(fā)揮的重要作用,從而為研究大腸桿菌體內(nèi)ssb、recG、recO基因?qū)?CAG)n(CTG)n重復(fù)序列不穩(wěn)定性的影響奠定基礎(chǔ)。本文首先利用P1噬菌體的普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)原理成功構(gòu)建ssb-113、recG、recO相關(guān)基因缺陷的菌株。紫外線輻射結(jié)果表明,不同基因型菌株的存活率不同。recG依賴和recO依賴的DNA復(fù)制過程中的紫外線輻射損傷的修復(fù)在SSB功能正常的細(xì)胞內(nèi)能力基本相當(dāng)。而recG和recO在ssb-113細(xì)胞內(nèi)分別作用于兩條與紫外線輻射修復(fù)有關(guān)的途徑中,這兩條途徑分別是:復(fù)制叉回轉(zhuǎn)和同源重組修復(fù),結(jié)合實驗室前期的結(jié)論,RecO優(yōu)先于Rec G與DNA單鏈結(jié)合蛋白SSB的C-末端作用可以引導(dǎo)紫外線損傷修復(fù)過程中使用recO依賴(RecO-dependent)紫外線損傷修復(fù)機(jī)制。此外,同時缺失ssb-113recGrecO的細(xì)胞的紫外線敏感性與ssb+recGrecO相當(dāng),表明recGrecO雙基因缺陷之后的細(xì)胞對紫外線輻射的修復(fù)能力與DNA單鏈結(jié)合蛋白的作用關(guān)系不明顯。羥基脲實驗結(jié)果表明,加入羥基脲使DNA復(fù)制叉停滯是由于DNA復(fù)制底物缺失,并沒有造成DNA的實質(zhì)損傷,因此RecG和RecO蛋白在此過程中作用不明顯,而ssb-113菌株對羥基脲更敏感。因此,處于DNA復(fù)制過程中的紫外線損傷需要RecG或RecO依賴的修復(fù)機(jī)制才能被有效加以修復(fù),UvrABC機(jī)制不能有效修復(fù)DNA復(fù)制過程中的紫外線損傷;RecG依賴的修復(fù)和RecO依賴的修復(fù)受SSB功能的調(diào)節(jié);上述發(fā)現(xiàn)只適用于紫外線輻射損傷過程,不適用于羥基脲誘導(dǎo)的DNA單鏈空缺的修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：三核苷酸重復(fù)序列 單鏈DNA結(jié)合蛋白 RecG蛋白 RecO蛋白 紫外線輻射損傷
【學(xué)位授予單位】：北京理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R744.7
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-19
• 1.1 本論文研究的目的和意義11
• 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢11-17
• 1.2.1 與CAG重復(fù)序列異常擴(kuò)增有關(guān)的脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)及研究現(xiàn)狀11-13
• 1.2.2 DNA復(fù)制、重組和損傷修復(fù)中相關(guān)蛋白的功能13-17
• 1.3 研究方案17-19
• 1.3.1 菌株構(gòu)建17-18
• 1.3.2 不同基因缺陷型菌株的表征18
• 1.3.3 (CAG)n(CTG)n重復(fù)序列在不同基因型菌株模型中復(fù)制的探索18-19
• 第2章 幾種基因缺陷型菌株的構(gòu)建19-31
• 2.1 引言19-20
• 2.2 實驗材料20-23
• 2.2.1 菌種及來源20
• 2.2.2 實驗儀器20-21
• 2.2.3 實驗試劑與耗材21
• 2.2.4 培養(yǎng)基及抗生素配制21-22
• 2.2.5 實驗用藥物及溶液的配制22-23
• 2.3 實驗方法23-26
• 2.3.1 P1噬菌體的活化23-24
• 2.3.2 制備不同菌株的P1噬菌體裂解液24-25
• 2.3.3 不同基因缺陷型菌株的構(gòu)建與驗證25-26
• 2.4 結(jié)果與討論26-30
• 2.4.1 P1噬菌體的活化26
• 2.4.2 菌株構(gòu)建與驗證26-30
• 2.5 本章小結(jié)30-31
• 第3章 不同基因缺陷型菌株的表征31-64
• 3.1 引言31-32
• 3.1.1 不同基因缺陷型菌株的生長曲線測定31
• 3.1.2 紫外線輻射對不同基因缺陷型菌株的影響31-32
• 3.1.3 羥基脲對不同基因缺陷型菌株生長的影響32
• 3.2 實驗材料32-33
• 3.2.1 菌株及其來源32-33
• 3.2.2 實驗儀器33
• 3.2.4 實驗試劑及耗材33
• 3.2.5 培養(yǎng)基及抗生素配制33
• 3.2.6 實驗用藥物與溶液的配制33
• 3.3 實驗方法33-37
• 3.3.1 不同基因缺陷型菌株生長曲線的測定33-34
• 3.3.2 紫外線輻射對不同基因缺陷型菌株的影響34-35
• 3.3.3 羥基脲對不同基因缺陷型菌株生長的影響35-37
• 3.4 實驗結(jié)果與分析37-62
• 3.4.1 不同基因缺陷型菌株生長曲線的測定37-38
• 3.4.2 紫外線輻射對不同基因缺陷型菌株生長的影響38-47
• 3.4.3 羥基脲對不同基因缺陷型菌株生長的影響47-62
• 3.5 本章小結(jié)62-64
• 第4章 (CAG)n(CTG)n在不同基因缺陷型菌株中復(fù)制的探索64-73
• 4.1 引言64
• 4.2 實驗材料64-65
• 4.2.1 菌株和質(zhì)粒及其來源64
• 4.2.2 實驗儀器64-65
• 4.2.3 實驗試劑及耗材65
• 4.2.4 培養(yǎng)基及抗生素配制65
• 4.2.5 實驗用藥物與溶液的配制65
• 4.3 實驗方法65-68
• 4.3.1 質(zhì)粒的提取及重復(fù)數(shù)的確定65-66
• 4.3.2 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化66-68
• 4.4 實驗結(jié)果與分析68-72
• 4.4.1 提取質(zhì)粒之后(CAG)n(CTG)n重復(fù)數(shù)的確定68-69
• 4.4.2 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化結(jié)果69-72
• 4.5 本章小結(jié)72-73
• 結(jié)論73-75
• 參考文獻(xiàn)75-81
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文與研究成果清單81-82
• 致謝82

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1 MA Wen li;DNA Diagnosis and Gene Therapy:Advances and Prospects in the 21st Century[J];深圳大學(xué)學(xué)報;2000年04期

2 葛學(xué)銘,陸應(yīng)麟,付生法,范文紅,劉爽;A NOVEL HUMAN DNA SEQUENCE WITH TUMOR METASTASIS SUPPRESSIVE ACTIVITY[J];Chinese Journal of Cancer Research;2000年02期

3 曹暉,劉玉萍,小松かつ子,畢培曦,邵鵬柱;DNA Molecular Profiling:A New Approach to Quality Control of Chinese Drugs[J];Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine;2000年01期

4 ;DNA REPAIR CAPACITY IN LUNG CANCER PATIENTS[J];癌變.畸變.突變;2001年04期

5 黃力拉,朱剛勁;被拐賣及失蹤兒童采血驗DNA前的心理問題及對策[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年03期

6 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

7 ;A Study of PCR with DNA Extracted from Single Cell Isolated from Histological Sections[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年01期

8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 ;Real time observation of the photocleavage of single DNA molecules[J];Chinese Science Bulletin;2003年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議暨浙江省計劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)綜合征的作用及其機(jī)制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟(jì)專家論壇論文集[C];2006年

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1 本報記者 袁滿;平安：把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟(jì)觀察報;2006年

2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2006年

3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年

5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年

7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運(yùn)動學(xué)建模及誤差實時校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)前后腫瘤負(fù)荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對肺癌診斷價值的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 王鵬;基于碳點@氧化石墨烯復(fù)合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

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  本文關(guān)鍵詞：SSB、RecG和RecO蛋白在DNA損傷修復(fù)中作用關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：335680