目的探討小分子化合物組合（Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021）誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）類(lèi)神經(jīng)分化的可行性。方法全骨髓貼壁法分離大鼠BMSCs,流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞。培養(yǎng)細(xì)胞至第3代,以含有Forskolin的神經(jīng)元培養(yǎng)基預(yù)誘導(dǎo)1d,再以含有Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021的神經(jīng)元培養(yǎng)基正式誘導(dǎo)3d。以神經(jīng)元培養(yǎng)基為對(duì)照組。通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)、免疫熒光檢測(cè)、Western blotting技術(shù)對(duì)類(lèi)神經(jīng)分化細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果大鼠BMSCs以梭形細(xì)胞為主,可見(jiàn)長(zhǎng)短不一的突起;經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定,CD90、CD105表達(dá)呈陽(yáng)性,而CD34和CD45表達(dá)呈陰性。誘導(dǎo)后,細(xì)胞有神經(jīng)樣形態(tài)改變,免疫熒光檢測(cè)到神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、巢蛋白（Nestin）陽(yáng)性表達(dá),誘導(dǎo)3d后Western blotting顯示實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)組與對(duì)照組比較,NSE、Nestin和SOX1表達(dá)增多（P<0.05）。結(jié)論小分子化合物組合（Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021）可誘導(dǎo)BMSCs類(lèi)神經(jīng)分化。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2020,30(19)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

誘導(dǎo)后細(xì)胞神經(jīng)特異性蛋白表達(dá)水平比較

誘導(dǎo)第1天,可見(jiàn)少數(shù)細(xì)胞折光性變強(qiáng),有較長(zhǎng)突起;誘導(dǎo)第2天,細(xì)胞形態(tài)變化更加明顯,突觸伸長(zhǎng),形成分支,并交織成網(wǎng),呈神經(jīng)細(xì)胞樣形態(tài),折光性更加明顯;誘導(dǎo)第3天,突起增多,相互連接成網(wǎng)。見(jiàn)圖3。2.3 免疫熒光鑒定BMSCs誘導(dǎo)后蛋白表達(dá)

Western blotting檢測(cè)細(xì)胞神經(jīng)特異性蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果顯示:NSE表達(dá)水平從對(duì)照組(0.463±0.154)上調(diào)至實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)組(0.918±0.232),Nestin表達(dá)水平從對(duì)照組(0.602±0.207)上調(diào)至實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)組(1.616±0.337),SOX1表達(dá)水平從對(duì)照組(0.510±0.187)上調(diào)至實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)組(1.272±0.328),組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.822、4.443和3.503,P=0.048、0.011和0.025)。見(jiàn)圖5。圖3 BMSCs誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)變化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]干細(xì)胞研究中的化學(xué)生物學(xué):學(xué)科交叉的新前沿[J]. 李文林,張冠宇,孫平新.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(02)
[2]TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路及其生物學(xué)功能[J]. 劉镕,趙琴平,董惠芬,蔣明森.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2014(01)
[3]Smad蛋白家族調(diào)控細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J]. 陳兵,易斌,魯開(kāi)智.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2013(05)
[4]誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J]. 單威,余勤,劉麗珍,王標(biāo).  中國(guó)生物工程雜志. 2012(09)



本文編號(hào)：3298113