背景:腦缺血引起的腦神經(jīng)細胞損傷機制依然是人們關注的重點。目前發(fā)現(xiàn),某些蛋白在生理與病理過程中的作用不一致甚至截然相反。Omi/Htr A2是一種絲氨酸蛋白酶,在線粒體中發(fā)生剪切,使其具有酶活性,存于線粒體間隙,線粒體通過未折疊蛋白反應清除錯誤折疊蛋白,而線粒體應激主要表現(xiàn)在線粒體內(nèi)未折疊蛋白的增加,Omi/Htr A2具有分子伴侶功能,參與了線粒體應激反應,此時具有一定的神經(jīng)保護作用。當在某些應激條件下被釋放到胞漿后與抑凋亡蛋白XIAP結(jié)合,并抑制XIAP與caspase9的結(jié)合,激活caspase9導致下游caspase3途徑的活化,引起細胞凋亡。而線粒體融合蛋白OPA1定位于線粒體內(nèi)膜,促進線粒體的網(wǎng)絡融合,參與了線粒體嵴形態(tài)的維持,并在細胞凋亡中發(fā)揮了重要的作用。因此,明確具有雙重作用的Omi/Htr A2在腦缺血再灌注細胞損傷中作用機制以及其與OPA1之間的關系可以為腦缺血再灌注損傷的臨床診斷治療提供新的思路和靶點。目的:采用線栓法復制大鼠大腦中動脈阻塞模型與PC12氧化應激損傷模型,從體內(nèi)外探討Omi/Htr A2通過影響OPA1誘導神經(jīng)元損傷的作用機制。方法:1.體內(nèi)實驗... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
主要英文縮略索引
第一章 緒論
    1.1 腦缺血再灌注損傷主要機制的概述
    1.2 氧化應激與缺血再灌注損傷
        1.2.1 ROS的產(chǎn)生
        1.2.2 氧化應激導致缺血再灌注損傷的機制
    1.3 Omi/HtrA2與腦缺血再灌注損傷
        1.3.1 線粒體絲氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 Omi/HtrA2誘導細胞凋亡
        1.3.3 Omi/HtrA2的神經(jīng)保護作用
        1.3.4 Omi/HtrA2參與腦損傷
    1.4 線粒體應激與腦缺血再灌注損傷
    1.5 線粒體融合分裂與腦缺血再灌注損傷
        1.5.1 線粒體內(nèi)膜融合相關蛋白OPA1
        1.5.2 線粒體網(wǎng)絡動態(tài)平衡與腦損傷
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗細胞株
        2.1.3 主要儀器及來源
        2.1.4 主要藥品及來源
        2.1.5 主要溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 tMCAO模型的制備
        2.2.2 TTC（紅四氮唑）染色
        2.2.3 H＆E染色
        2.2.4 PC12細胞的培養(yǎng)
        2.2.5 MTT法測定細胞生存率
        2.2.6 總蛋白的提取
        2.2.7 蛋白濃度的測定
        2.2.8 Western Bloting
        2.2.9 JC-1 染色
        2.2.10 Mitotracker染色
        2.2.11 免疫共沉淀
    2.3 統(tǒng)計學處理
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 Omi/Htr A2在腦缺血再灌注損傷中的作用
        3.1.1 TTC 染色觀察大鼠各組大腦梗死面積
        3.1.2 H＆E 染色觀察大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)細胞損傷變化
        3.1.3 Western Blot 檢測大鼠腦缺血側(cè)皮質(zhì)凋亡相關蛋白的表達
        3.1.4 Western Blot 檢測大鼠腦缺血側(cè)皮質(zhì) Omi/Htr A2 的表達
    3.2 Omi/Htr A2對氧化應激誘導凋亡的影響
        3.2.1 MTT檢測不同濃度H2O2作用下PC12細胞存活率
        3.2.2 Western Blot檢測不同濃度H2O2作用下PC12細胞凋亡蛋白的表達
        3.2.3 倒置顯微鏡下觀察PC12細胞形態(tài)學變化
        3.2.4 臺盼藍染色測定PC12細胞存活率
        3.2.5 Western Blot檢測細胞凋亡
        3.2.6 Western Blot檢測PC12細胞Omi/HtrA2表達變化
    3.3 Omi/HtrA2 對 PC12 細胞線粒體形態(tài)及功能的影響
        3.3.1 Mitotracker染色觀察Omi/HtrA2對PC12細胞線粒體形態(tài)變化的影響
        3.3.2 Western Blot檢測PC12細胞線粒體應激反應相關蛋白的變化
        3.3.3 JC-1 染色檢測PC12細胞線粒體膜電勢變化
    3.4 Omi/HtrA2對PC12細胞OPA1表達變化的影響
        3.4.1 Western Blot檢測PC12細胞OPA1變化
        3.4.2 免疫共沉淀檢測Omi/Htr A2與OPA1的相互作用
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻
作者簡介及科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]JC-1單染法檢測CCCP對內(nèi)皮細胞線粒體膜電位的影響[J]. 官福新,周露露,張宸豪,李妍.  吉林醫(yī)藥學院學報. 2014(05)
[2]OPA1的研究進展[J]. 聶唯天,張歌,胡贏心,宮健,單春華.  現(xiàn)代生物醫(yī)學進展. 2014(12)
[3]PC12細胞作為氧化應激細胞模型的研究進展[J]. 黎巍威,王學美.  中國中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2011(11)



本文編號：3266610