背景:腦缺血引起的腦神經(jīng)細(xì)胞損傷機(jī)制依然是人們關(guān)注的重點(diǎn)。目前發(fā)現(xiàn),某些蛋白在生理與病理過程中的作用不一致甚至截然相反。Omi/Htr A2是一種絲氨酸蛋白酶,在線粒體中發(fā)生剪切,使其具有酶活性,存于線粒體間隙,線粒體通過未折疊蛋白反應(yīng)清除錯(cuò)誤折疊蛋白,而線粒體應(yīng)激主要表現(xiàn)在線粒體內(nèi)未折疊蛋白的增加,Omi/Htr A2具有分子伴侶功能,參與了線粒體應(yīng)激反應(yīng),此時(shí)具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。當(dāng)在某些應(yīng)激條件下被釋放到胞漿后與抑凋亡蛋白XIAP結(jié)合,并抑制XIAP與caspase9的結(jié)合,激活caspase9導(dǎo)致下游caspase3途徑的活化,引起細(xì)胞凋亡。而線粒體融合蛋白OPA1定位于線粒體內(nèi)膜,促進(jìn)線粒體的網(wǎng)絡(luò)融合,參與了線粒體嵴形態(tài)的維持,并在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮了重要的作用。因此,明確具有雙重作用的Omi/Htr A2在腦缺血再灌注細(xì)胞損傷中作用機(jī)制以及其與OPA1之間的關(guān)系可以為腦缺血再灌注損傷的臨床診斷治療提供新的思路和靶點(diǎn)。目的:采用線栓法復(fù)制大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞模型與PC12氧化應(yīng)激損傷模型,從體內(nèi)外探討Omi/Htr A2通過影響OPA1誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷的作用機(jī)制。方法:1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
主要英文縮略索引
第一章 緒論
    1.1 腦缺血再灌注損傷主要機(jī)制的概述
    1.2 氧化應(yīng)激與缺血再灌注損傷
        1.2.1 ROS的產(chǎn)生
        1.2.2 氧化應(yīng)激導(dǎo)致缺血再灌注損傷的機(jī)制
    1.3 Omi/HtrA2與腦缺血再灌注損傷
        1.3.1 線粒體絲氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 Omi/HtrA2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        1.3.3 Omi/HtrA2的神經(jīng)保護(hù)作用
        1.3.4 Omi/HtrA2參與腦損傷
    1.4 線粒體應(yīng)激與腦缺血再灌注損傷
    1.5 線粒體融合分裂與腦缺血再灌注損傷
        1.5.1 線粒體內(nèi)膜融合相關(guān)蛋白OPA1
        1.5.2 線粒體網(wǎng)絡(luò)動(dòng)態(tài)平衡與腦損傷
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.1.3 主要儀器及來源
        2.1.4 主要藥品及來源
        2.1.5 主要溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 tMCAO模型的制備
        2.2.2 TTC（紅四氮唑）染色
        2.2.3 H＆E染色
        2.2.4 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.5 MTT法測(cè)定細(xì)胞生存率
        2.2.6 總蛋白的提取
        2.2.7 蛋白濃度的測(cè)定
        2.2.8 Western Bloting
        2.2.9 JC-1 染色
        2.2.10 Mitotracker染色
        2.2.11 免疫共沉淀
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 Omi/Htr A2在腦缺血再灌注損傷中的作用
        3.1.1 TTC 染色觀察大鼠各組大腦梗死面積
        3.1.2 H＆E 染色觀察大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞損傷變化
        3.1.3 Western Blot 檢測(cè)大鼠腦缺血側(cè)皮質(zhì)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.1.4 Western Blot 檢測(cè)大鼠腦缺血側(cè)皮質(zhì) Omi/Htr A2 的表達(dá)
    3.2 Omi/Htr A2對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)凋亡的影響
        3.2.1 MTT檢測(cè)不同濃度H2O2作用下PC12細(xì)胞存活率
        3.2.2 Western Blot檢測(cè)不同濃度H2O2作用下PC12細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)
        3.2.3 倒置顯微鏡下觀察PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        3.2.4 臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定PC12細(xì)胞存活率
        3.2.5 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        3.2.6 Western Blot檢測(cè)PC12細(xì)胞Omi/HtrA2表達(dá)變化
    3.3 Omi/HtrA2 對(duì) PC12 細(xì)胞線粒體形態(tài)及功能的影響
        3.3.1 Mitotracker染色觀察Omi/HtrA2對(duì)PC12細(xì)胞線粒體形態(tài)變化的影響
        3.3.2 Western Blot檢測(cè)PC12細(xì)胞線粒體應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)蛋白的變化
        3.3.3 JC-1 染色檢測(cè)PC12細(xì)胞線粒體膜電勢(shì)變化
    3.4 Omi/HtrA2對(duì)PC12細(xì)胞OPA1表達(dá)變化的影響
        3.4.1 Western Blot檢測(cè)PC12細(xì)胞OPA1變化
        3.4.2 免疫共沉淀檢測(cè)Omi/Htr A2與OPA1的相互作用
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]JC-1單染法檢測(cè)CCCP對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞線粒體膜電位的影響[J]. 官福新,周露露,張宸豪,李妍.  吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2014(05)
[2]OPA1的研究進(jìn)展[J]. 聶唯天,張歌,胡贏心,宮健,單春華.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2014(12)
[3]PC12細(xì)胞作為氧化應(yīng)激細(xì)胞模型的研究進(jìn)展[J]. 黎巍威,王學(xué)美.  中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2011(11)



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