研究背景及目的:軟骨素聚合因子（Chondroitin polymerizing factor,CHPF）是新發(fā)現(xiàn)的,一類跨膜蛋白（II型）。最新研究發(fā)現(xiàn),CHPF在頭頸部鱗狀癌、喉癌、結(jié)直腸癌中表達(dá)水平升高,并可能與腫瘤的發(fā)生的關(guān)系密切。本課題組在早期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn),在腦膠質(zhì)瘤的腫瘤組織中的CHPF的表達(dá)量要高于在對(duì)照的正常腦組織中的表達(dá)量。故本研究擬在前期研究的基礎(chǔ)上,擬構(gòu)建靶向下調(diào)CHPF表達(dá)的慢病毒載體,探討腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞下調(diào)CHPF基因表達(dá)后侵襲及增殖的影響及與單核細(xì)胞趨化蛋白1（MCP-1,CCL2）的關(guān)系及作用機(jī)制。研究方法:1.悉心培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤的U87細(xì)胞系,構(gòu)建靶向敲底CHPF表達(dá)的慢病毒表達(dá)載體,并感染人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞。根據(jù)熒光情況判斷轉(zhuǎn)染成功效率。2.實(shí)驗(yàn)共分為三個(gè)組:空白對(duì)照組、NC-shRNA組和CHPF-shRNA組。3.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè)各組細(xì)胞CHPF的mRNA的水平。蛋白質(zhì)印跡法用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞CHPF的蛋白的水平。4.利用CCK8的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)慢病毒CHPF-shRNA感染后各組膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖能力的改變。利用流式... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡檢測(cè)72小時(shí)慢病毒載體CHPFshRNA轉(zhuǎn)染后的U87細(xì)胞的熒光

pression levels of CHPF protein in U87 cells after transfection with CHPF-shd by Western blot.測(cè) CHPF-shRNA 轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤 U87 細(xì)胞后檢測(cè) CHPF 蛋白的表達(dá)水平8 法檢測(cè)轉(zhuǎn)染 CHPF-shRNA 后 U87 細(xì)胞增殖水平改變檢測(cè)結(jié)果顯示，U87 細(xì)胞中轉(zhuǎn)入 CHPF-shRNA 后，與空白對(duì) 組比較，CHPF-shRNA 組細(xì)胞的增殖能力明顯減弱（P 值均＜ 照組與 NC-shRNA 組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）示。結(jié)果表明，抑制 CHPF 表達(dá)能顯著抑制 U87 細(xì)胞的增殖。

Fig.6 Flow cytometry showing the cell cycles of U87 cells after transfection of CHPF-shRNA圖 6 流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)周期方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染 CHPF-shRNA 后三組細(xì)胞周期情況3.7 流式細(xì)胞術(shù)分析 U87 細(xì)胞感染 CHPF-shRNA 后凋亡水平的改變實(shí)驗(yàn)結(jié)果：空白組的凋亡率為（7.31±2.16）%，NC-shRNA 組為（7.15±1.07）%，CHPF shRNA 組為（13.97±1.70）%。與空白對(duì)照組及 NC-shRNA 組相比，CHPFshRNA 組細(xì)胞的凋亡率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 值均＜ 0.05），如圖 7 所示。NC-shRNA 組與空白組比較，差異無顯著性。結(jié)果表明 CHPF 表達(dá)受抑制后明顯促進(jìn)膠質(zhì)瘤 U87 細(xì)胞的凋亡水平。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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