第一部分缺氧對原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元凋亡及Tyro 3/Akt信號的影響目的:建立海馬神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)模型,檢測缺氧對海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡及Tyro 3/Akt信號影響,以探討Tyro 3/Akt信號在缺氧導(dǎo)致海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷中的作用。方法:培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)細(xì)胞,以MAP 2免疫熒光法鑒定海馬神經(jīng)細(xì)胞純度,將培養(yǎng)的細(xì)胞隨機分為對照組、缺氧組A（缺氧12h）、缺氧組B（缺氧24h）,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),以MTT法測細(xì)胞增殖活力,運用TUNEL法測細(xì)胞凋亡,采用免疫熒光法測細(xì)胞Tyro 3蛋白的表達(dá),運用Western blot法測Akt磷酸化水平。結(jié)果:1.經(jīng)MAP 2免疫熒光法鑒定,原代培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞純度達(dá)89%,基本達(dá)到實驗所需;2.缺氧抑制神經(jīng)細(xì)胞增殖活力（P<0.01）,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡（P<0.01）,并呈時間依賴性（P<0.01）。3.缺氧抑制細(xì)胞Tyro 3蛋白表達(dá)（P<0.01）,降低Akt的磷酸化水平（P<0.01）,并隨缺氧時間的延長呈加重的趨勢。結(jié)論:缺氧具有抑制海馬神經(jīng)細(xì)胞增殖,促進細(xì)胞凋亡的作用,并且Tyro 3/Akt信號受抑制在缺氧... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

原代培養(yǎng)不同時間海馬神經(jīng)細(xì)胞的生長狀況（×20）

MAP 2免疫熒光法鑒定原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元(A:×Immunofluorescence staining for MAP 2 of hippocampal ulture (A: ×10, B: ×20)馬神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)的影響缺氧對 SD 大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)的影響，本實氧后12和24小時分別觀察 SD 乳鼠海馬神經(jīng)細(xì)：與對照組相比，缺氧12小時海馬神經(jīng)細(xì)胞胞斷下降，細(xì)胞內(nèi)容物破壞，出現(xiàn)空泡樣變；細(xì)消失。缺氧24小時海馬神經(jīng)細(xì)胞減少、消失明細(xì)胞和壞死細(xì)胞遺留的輪廓。

24圖1.3 缺氧時間對SD大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)影響(×20)A:正常組 B：缺氧12小時 C:缺氧24小時Fig 1.3 The morphology of cultured hippocampal neural cells in different time after anoxiaA:The normal group B：The hypoxia group A (12 hours after hypoxia) C: Thehypoxia group B (24 hours after hypoxia)3.4 缺氧對海馬神經(jīng)細(xì)胞增殖活力的影響為了探討缺氧對 SD 乳鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞增殖活力的影響，本實驗應(yīng)用MTT法觀測原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)細(xì)胞在缺氧12h 和 24h時的值。如圖1.4所示：與對照組相比，缺氧組A和缺氧組B海馬神經(jīng)細(xì)胞活性明顯降低，并在缺氧24h 時達(dá)到最低（P＜0.01），此結(jié)果提示缺氧可抑制原代培養(yǎng)乳鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的生長增殖活力，并且呈時間依賴性。

【參考文獻】：
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本文編號：3244710