目的:探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔助活化因子1α（PGC-1α）基因過表達(dá)對氧糖剝奪/復(fù)氧（OGD/R）誘導(dǎo)的神經(jīng)元線粒體功能及細(xì)胞凋亡的影響。方法:采用RT-PCR的方法從C57BL/6乳鼠大腦皮層獲取PGC-1α的全基因序列,并克隆到真核表達(dá)載體p EGFP-N1上,經(jīng)PCR初步鑒定后轉(zhuǎn)染原代皮層神經(jīng)元,Western blot鑒定PGC-1α的表達(dá)情況,成功構(gòu)建PGC-1α真核表達(dá)載體p EGFP-N1-PGC-1α。分別將轉(zhuǎn)染p EGFP-N1和p EGFP-N1-PGC-1α載體的皮層神經(jīng)元進(jìn)行OGD/R處理,分別采用Mito Tracker Red染色、流式細(xì)胞術(shù)、ATP代謝檢測試劑盒和TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測線粒體質(zhì)量分?jǐn)?shù)、活性氧簇（ROS）和ATP生成、細(xì)胞凋亡以及caspase-3激活的變化。結(jié)果:PGC-1α過表達(dá)可抑制OGD/R誘導(dǎo)的神經(jīng)元線粒體生成能力的降低和ROS的生成（P<0.05）,增強(qiáng)ATP的合成能力（P<0.01）,抑制神經(jīng)元的凋亡（P<0.01）并降低caspase-3的激活（P<0.05）。結(jié)論:PGC-1α過... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2017,33(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料和試劑
    2 方法
        2.1 載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染
        2.2 原代神經(jīng)元培養(yǎng)
        2.3 構(gòu)建氧糖剝奪/復(fù)氧模型
        2.4 線粒體質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測
        2.5 ROS及ATP含量的檢測
        2.6 TUNEL檢測細(xì)胞凋亡
        2.7 Western blot實(shí)驗(yàn)
    3 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)處理
結(jié)果
    1 PGC-1α過表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    2 PGC-1α過表達(dá)對OGD/R誘導(dǎo)的神經(jīng)元線粒體質(zhì)量和功能的影響
    3 PGC-1α過表達(dá)對OGD/R誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡的影響
    4 PGC-1α過表達(dá)對凋亡執(zhí)行蛋白表達(dá)的影響
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]線粒體生成與腦缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展[J]. 王來,祝世功.  中國病理生理雜志. 2016(08)
[2]pEGFP-N1-VirB8真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在大鼠腦內(nèi)的表達(dá)[J]. 馬曉娟,劉愛翠,馬巧麗,王釗,王振海.  寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016(04)
[3]大豆異黃酮對腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的線粒體損傷和腦細(xì)胞凋亡的影響[J]. 趙士弟,陳耀,姜麗娜,董銀鳳,陳前芬.  中國病理生理雜志. 2014(12)
[4]pEGFP-HSP70重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 舒曉明,逯丹,王珍,張嬋娟,趙佳儀,朱麗紅,戚仁斌,陸大祥.  中國病理生理雜志. 2014(05)
[5]Nrf2過表達(dá)對乙醇刺激下肝星狀細(xì)胞激活與增殖及合成Ⅰ型膠原的影響[J]. 劉曼,何月,張吉翔.  中國病理生理雜志. 2013(09)



本文編號：3192000