目的線粒體分裂和融合、線粒體自噬等的調(diào)控在維持線粒體穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,而線粒體穩(wěn)態(tài)是維持細(xì)胞功能、減輕腦缺血再灌注損傷的關(guān)鍵。本研究旨在探討腦缺血再灌注過(guò)程中KEAP1/NRF2/ARE信號(hào)通路的激活及其對(duì)線粒體自噬的調(diào)控作用。方法我們利用人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y氧糖剝奪模型模擬腦缺血再灌注損傷,將細(xì)胞培養(yǎng)至生長(zhǎng)狀態(tài)良好,密度約70%后,隨機(jī)分成四個(gè)組:（1）正常組（C組）:進(jìn)行正常培養(yǎng),不做任何特殊處理;（2）缺血/再灌注組（I/R組）:將細(xì)胞氧糖剝奪4h后,恢復(fù)氧糖供應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)18h,即構(gòu)建缺血/再灌注模型成功;（3）鴉膽子苦醇+缺血/再灌注組（Bru+I/R組）:缺血缺氧前4h加入KEAP1/NRF2/ARE信號(hào)通路抑制劑鴉膽子苦醇（Brusatol,Bru）100nM,隨后進(jìn)行缺血缺氧再灌注過(guò)程;（4）賦形劑組（Veh+I/R組）:缺血缺氧前4h加入二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）,因其細(xì)胞毒性,將終濃度控制于<0.1%,隨后進(jìn)行缺血缺氧再灌注過(guò)程。使用透射電子顯微鏡來(lái)觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)。Western blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞中通路... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        1.3 主要儀器與設(shè)備
    2 SH-SY5Y細(xì)胞的培養(yǎng)及氧糖剝奪模型的建立
    3 實(shí)驗(yàn)分組
    4 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞的活性
    5 細(xì)胞免疫熒光
    6 活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染觀察細(xì)胞生存
    7 流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率
    8 透射電鏡觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)
    9 Western blot檢測(cè)通路和線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)
        9.1 提取總蛋白
        9.2 提取細(xì)胞核蛋白
        9.3 蛋白濃度檢測(cè)
        9.4 Western Blot
    10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力
    2 透射電鏡下細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化
    3 自噬相關(guān)蛋白和通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
    4 活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染檢測(cè)細(xì)胞活力
    5 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)結(jié)果
    6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腦泰方對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬區(qū)Nrf2、HO-1和膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)輔助蛋白表達(dá)的影響[J]. 黃娟,廖君,彭熙煒,劉洋,成紹武,秦莉花,鄧奕輝,王國(guó)佐,賀旭,葛金文.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2017(10)

博士論文
[1]PINK1基因通過(guò)線粒體分裂融合途徑對(duì)腦缺血的神經(jīng)保護(hù)作用[D]. 陳方哲.復(fù)旦大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3189703