目的線粒體分裂和融合、線粒體自噬等的調(diào)控在維持線粒體穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,而線粒體穩(wěn)態(tài)是維持細胞功能、減輕腦缺血再灌注損傷的關(guān)鍵。本研究旨在探討腦缺血再灌注過程中KEAP1/NRF2/ARE信號通路的激活及其對線粒體自噬的調(diào)控作用。方法我們利用人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y氧糖剝奪模型模擬腦缺血再灌注損傷,將細胞培養(yǎng)至生長狀態(tài)良好,密度約70%后,隨機分成四個組:（1）正常組（C組）:進行正常培養(yǎng),不做任何特殊處理;（2）缺血/再灌注組（I/R組）:將細胞氧糖剝奪4h后,恢復(fù)氧糖供應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)18h,即構(gòu)建缺血/再灌注模型成功;（3）鴉膽子苦醇+缺血/再灌注組（Bru+I/R組）:缺血缺氧前4h加入KEAP1/NRF2/ARE信號通路抑制劑鴉膽子苦醇（Brusatol,Bru）100nM,隨后進行缺血缺氧再灌注過程;（4）賦形劑組（Veh+I/R組）:缺血缺氧前4h加入二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）,因其細胞毒性,將終濃度控制于<0.1%,隨后進行缺血缺氧再灌注過程。使用透射電子顯微鏡來觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)。Western blot方法檢測各組細胞中通路... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 實驗材料與試劑
        1.3 主要儀器與設(shè)備
    2 SH-SY5Y細胞的培養(yǎng)及氧糖剝奪模型的建立
    3 實驗分組
    4 CCK-8檢測細胞的活性
    5 細胞免疫熒光
    6 活細胞/死細胞雙染觀察細胞生存
    7 流式細胞儀測定細胞凋亡率
    8 透射電鏡觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)
    9 Western blot檢測通路和線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達
        9.1 提取總蛋白
        9.2 提取細胞核蛋白
        9.3 蛋白濃度檢測
        9.4 Western Blot
    10 統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    1 CCK-8檢測細胞活力
    2 透射電鏡下細胞超微結(jié)構(gòu)變化
    3 自噬相關(guān)蛋白和通路相關(guān)蛋白的表達
    4 活細胞/死細胞雙染檢測細胞活力
    5 細胞免疫熒光檢測結(jié)果
    6 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]腦泰方對腦缺血/再灌注大鼠海馬區(qū)Nrf2、HO-1和膜鐵轉(zhuǎn)運輔助蛋白表達的影響[J]. 黃娟,廖君,彭熙煒,劉洋,成紹武,秦莉花,鄧奕輝,王國佐,賀旭,葛金文.  中國藥理學(xué)通報. 2017(10)

博士論文
[1]PINK1基因通過線粒體分裂融合途徑對腦缺血的神經(jīng)保護作用[D]. 陳方哲.復(fù)旦大學(xué) 2013



本文編號：3189703