背景和目的帕金森�。≒arkinson’s disease，PD）是一種中老年常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其發(fā)病率的上升不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，而且給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。PD的臨床癥狀包括靜態(tài)下震顫、反應(yīng)遲鈍、僵硬和姿勢扭曲等。PD的主要病理特點(diǎn)是黑質(zhì)致密部的多巴胺能神經(jīng)元丟失，進(jìn)而使紋狀體內(nèi)的多巴胺水平降低。目前，PD的發(fā)病原因尚不完全清楚。各類體內(nèi)和體外實(shí)4驗(yàn)顯示，PD的發(fā)病機(jī)制涉及線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激、泛素化蛋白酶體等途徑。最近的研究表明，PD發(fā)病機(jī)制還涉及未折疊蛋白聚積引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress, ER stress）介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡參與PD的發(fā)病過程。因此，深入了解PD發(fā)病機(jī)制，探尋有效的神經(jīng)保護(hù)劑是目前治療PD的重要策略。PD發(fā)病機(jī)制的探討和潛在治療藥物的篩選及評價(jià)，在很大程度上依賴于疾病相關(guān)體內(nèi)外模型的建立及應(yīng)用，特別是離體細(xì)胞模型的建立及應(yīng)用。眾所周知，PD是一種慢性疾病，具有緩慢、進(jìn)展性的發(fā)病過程和特征，但是目前國內(nèi)用于PD發(fā)病機(jī)制和藥物篩選的離體細(xì)胞模型大多為急性損傷模型。我們的實(shí)踐證明，采用常... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
引言
第1章 緒論
    1.1 帕金森病的研究進(jìn)展
        1.1.1 帕金森病的發(fā)病機(jī)制
        1.1.2 帕金森病的動(dòng)物模型和細(xì)胞模型
        1.1.3 帕金森病的臨床治療
    1.2 多肽治療帕金森病的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 動(dòng)物和植物來源多肽
        1.2.2 生物內(nèi)源性多肽
        1.2.3 人工合成多肽
第2章 VAPs 的提取、分離和純化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試劑
        2.1.2 儀器
        2.1.3 鹿茸
    2.2 試劑配制
        2.2.1 SDS-PAGE 相關(guān)試劑配制
        2.2.2 考馬斯亮藍(lán)蛋白含量測定相關(guān)試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 鹿茸總多肽（VAPs）的提取
        2.3.2 SDS-PAGE
        2.3.3 VAPs 氨基酸組成分析
        2.3.4 VAPs 激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.5 討論
第3章 VAPs 對 MPP~+急性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞的保護(hù)作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試劑
        3.1.2 儀器
        3.1.3 細(xì)胞
    3.2 試劑配制
        3.2.1 藥物配制
        3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑配制
        3.2.3 Western blot 試驗(yàn)相關(guān)試劑的配制
        3.2.4 免疫細(xì)胞化學(xué)相關(guān)溶液的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 MTT 法檢測 MPP~+對 SH-SY5Y 細(xì)胞的損傷作用
        3.3.3 MTT 法檢測 VAPs 對 MPP~+急性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞的保護(hù)作用
        3.3.4 Hoechst 33342 染色檢測細(xì)胞凋亡
        3.3.5 羅丹明 123 染色檢測△Ψm 改變
        3.3.6 細(xì)胞內(nèi) ROS 水平的檢測
        3.3.7 Western blot 檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白
        3.3.8 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 VAPs 對 MPP~+急性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞的保護(hù)作用
        3.4.2 VAPs 對 MPP~+急性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞凋亡的抑制作用
        3.4.3 VAPs 可部分恢復(fù) MPP~+急性損傷SH-SY5Y 細(xì)胞的△Ψm
        3.4.4 VAPs 可降低 MPP~+急性損傷SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)活性氧簇含量
        3.4.5 VAPs 對 MPP~+急性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    3.5 討論
第4章 VAPs 對 MPP~+慢性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞的保護(hù)作用
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試劑
        4.1.2 儀器
        4.1.3 細(xì)胞
    4.2 試劑配制
        4.2.1 藥物配制
        4.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑配制
        4.2.3 熒光染色相關(guān)試劑的配制
        4.2.4 Western blot 試驗(yàn)相關(guān)試劑的配制
        4.2.5 免疫細(xì)胞化學(xué)相關(guān)試劑的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.3.2 MTT 法檢測 MPP~+對 SH-SY5Y 細(xì)胞的損傷作用
        4.3.3 MTT 法檢測 VAPs 對 MPP~+慢性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞的保護(hù)作用
        4.3.4 Hoechst 33342 染色檢測細(xì)胞凋亡
        4.3.5 羅丹明 123 染色檢測線粒體膜電位改變
        4.3.6 H2DCFDA 染色檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧簇
        4.3.7 Western blot 檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白
        4.3.8 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 VAPs 對 MPP~+慢性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞的保護(hù)作用
        4.4.2 VAPs 對 MPP~+慢性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞凋亡的影響
        4.4.3 VAPs 對 MPP~+慢性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞的線粒體膜電位的影響
        4.4.4 VAPs 對 MPP~+慢性損傷SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)ROS含量的影響
        4.4.5 VAPs 下調(diào) MPP~+慢性損傷 SH-SY5Y 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)
    4.5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間所得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[5]6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞帕金森病模型差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 王丹萍.吉林大學(xué) 2010
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[7]利用果蠅模型研究帕金森病相關(guān)基因α-synuclein，PINK1和LRRK2的作用機(jī)制[D]. 劉小平.中南大學(xué) 2007
[8]梅花鹿茸多肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其抗肝纖維化作用[D]. 段冷昕.吉林大學(xué) 2007

碩士論文
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[2]帕金森病現(xiàn)代中醫(yī)證治規(guī)律研究[D]. 孫家賀.山東中醫(yī)藥大學(xué) 2012
[3]DTT誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-自噬過程中活性氧的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制[D]. 項(xiàng)喜艷.吉林大學(xué) 2012
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本文編號：3169146