西尼羅病毒（West Nile virus, WNV）與乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是一類(lèi)重要的人獸共患病病原。NS1（Nonstructural protein1）是一個(gè)極其重要的非結(jié)構(gòu)蛋白，可以在病毒感染動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生非中和活性抗體并為動(dòng)物提供有效的免疫保護(hù)。因此，確定WNV NS1蛋白的免疫分子基礎(chǔ)以及對(duì)JEV的交叉保護(hù)效果，可以為臨床WNV與JEV感染診斷以及黃病毒交叉保護(hù)性疫苗的研制做好技術(shù)儲(chǔ)備，具有重要的意義。本研究利用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)WNV NS1蛋白，純化后經(jīng)WB（Western blot）證實(shí)所表達(dá)的蛋白具有良好的生物學(xué)活性。利用之免疫Balb/c小鼠，獲得8株鼠源單克隆抗體（monoclonal antibodies, mAbs）以及多克隆抗體（polyclonal antibodies, pAbs）；同時(shí)將WNV NS1蛋白截短表達(dá)為35條互相重疊6個(gè)氨基酸（aa）的麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）融合16肽。利用上述材料以及WB和ELISA對(duì)WNV NS1蛋白的鼠源表位圖譜進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示：利用... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 WNV 概覽
        1.1.1 WNV 分類(lèi)
        1.1.2 WNV 基因組結(jié)構(gòu)與復(fù)制
        1.1.3 WNV 分子流行病學(xué)
        1.1.4 WNV 致病性及分布
        1.1.5 WNV 的傳播
    1.2 WNV 編碼蛋白質(zhì)及其功能
        1.2.1 C 蛋白
        1.2.2 prM 蛋白
        1.2.3 E 蛋白
        1.2.4 NS1 蛋白
        1.2.5 NS2A、NS2B、NS4A 和 NS4B 蛋白
        1.2.6 NS3 蛋白
        1.2.7 NS5 蛋白
    1.3 JE 血清群病毒交叉保護(hù)研究進(jìn)展
        1.3.1 JE 血清群病毒的全球分布及其傳播
        1.3.2 JE 血清群病毒交叉保護(hù)免疫的可行性
        1.3.3 JE 血清群病毒疫苗所產(chǎn)生的交叉保護(hù)性免疫效果
        1.3.4 JE 血清群病毒疫苗免疫對(duì)該群異源病毒攻擊產(chǎn)生的危害性
    1.4 黃病毒 NS1 蛋白在疾病預(yù)防治療方面的應(yīng)用及其分子基礎(chǔ)
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 WNV NS1 蛋白 pAbs 與 mAb 制備及表位圖譜繪制
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 細(xì)胞、質(zhì)粒、血清樣品、病毒和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 重組 NS1 蛋白表達(dá)純化以及生物學(xué)活性鑒定
        2.1.3 WNV NS1 蛋白鼠源 pAbs 制備
        2.1.4 WNV NS1 蛋白 mAb 的制備以及鑒定
        2.1.5 WNV NS1 蛋白截短表達(dá)
        2.1.6 WNV NS1 蛋白鼠源表位圖譜繪制
        2.1.7 表位特異性鑒定
        2.1.8 WNV NS1 蛋白特異性 B 細(xì)胞表位的保守性分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 NS1 蛋白 mAb 的制備與鑒定
        2.2.2 NS1 蛋白特異性 mAb 的表位鑒定
        2.2.3 利用鼠源 pAbs 全面掃描 NS1 蛋白上的線性 B 細(xì)胞表位
        2.2.4 表位特異性鑒定
        2.2.5 WNV 特異性 B 細(xì)胞表位的保守性分析
    2.3 本章小結(jié)
    2.4 本章討論
第三章 WNV NS1 蛋白禽源優(yōu)勢(shì)表位圖譜繪制
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、NS1 蛋白及 MBP 融合多肽
        3.1.2 禽源 pAbs 制備與鑒定
        3.1.3 利用 WB 全面掃描 NS1 蛋白禽源表位圖譜
        3.1.4 利用 ELISA 進(jìn)一步確定所鑒定的禽源表位
        3.1.5 三個(gè)共有表位的特異性分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 禽源 pAbs 抗體滴度測(cè)定
        3.2.2 WNV NS1 蛋白禽源表位圖譜繪制
        3.2.3 利用合成肽再次確定所鑒定的線性 B 細(xì)胞表位
        3.2.4 禽源共有優(yōu)勢(shì)表位特異性分析
    3.3 本章小結(jié)
    3.4 本章討論
第四章 WNV NS1 蛋白對(duì) JEV 的交叉保護(hù)作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、病毒、NS1 蛋白與 MBP 融合多肽
        4.1.2 NS1 蛋白免疫程序以及血清抗體監(jiān)測(cè)
        4.1.3 JEV 攻毒實(shí)驗(yàn)以及保護(hù)力評(píng)價(jià)
        4.1.4 攻毒后存活成年鼠血清抗體檢測(cè)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 WNV NS1 蛋白對(duì) JEV 的交叉保護(hù)作用
        4.2.2 存活成年鼠血清中和抗體效價(jià)測(cè)定
        4.2.3 存活成年鼠血清抗體與 WNV NS1 蛋白交叉表位掃描
    4.3 本章小結(jié)
    4.4 本章討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3153925