目的:神經(jīng)病理性疼痛是一種神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)損害或功能障礙引起的慢性疼痛疾病,嚴重影響患者生活質量。多種不同的損傷,如外傷、神經(jīng)損傷或感染都可引起神經(jīng)病理性疼痛。研究顯示,表觀遺傳學機制參與神經(jīng)病理性疼痛,且神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的相互作用可能是疼痛慢性化的關鍵。神經(jīng)損傷后DRG內MOR基因啟動子區(qū)受到DNA甲基化修飾的調控,MOR表達降低,減少阿片藥物的作用靶點,使阿片藥物對神經(jīng)病理性疼痛小鼠的鎮(zhèn)痛效應降低。IL-6可通過上調DNMT的表達促進多種抑癌基因啟動子區(qū)域甲基化增強,抑制多種抑癌基因的表達。多項研究表明,IL-6可能在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)展中發(fā)揮關鍵作用。因此,我們提出以下假說:外周神經(jīng)損傷引起IL-6表達上調,并與IL-6R結合,激活IL-6經(jīng)典信號通路,上調DNMT3a的表達,促進初級感覺神經(jīng)元MOR基因啟動子區(qū)甲基化,使MOR蛋白表達降低并減弱嗎啡的鎮(zhèn)痛效應。本課題旨在確定坐骨神經(jīng)損傷后的神經(jīng)病理性疼痛模型DRG中涉及神經(jīng)免疫相互作用的內源性IL-6和MOR之間的關系。方法:我們應用分子生物學檢測技術在動物和細胞中進行如下實驗:第一部分:觀察CCI模型小鼠DRG中IL-6和DNM... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１?ＣＣＩ組及Ｓｈａｍ組小鼠術后７天痛行為學

Ｔｉｍｅ?ａｆｔｅｒ?ｓｕｒｇｅｒｙ?（ｄ）?Ｔｉｍｅ?ａｆｔｅｒ?ｓｕｒｇｅｒｙ?（ｄ）??圖１．１?ＣＣＩ組及Ｓｈａｍ組小鼠術后７天痛行為學。兩組均在造模前及造模后１天，??３?天，５?天，７?天測量?ＰＷＬ?（Ａ）和?ＰＷＴ?（Ｂ）。＊Ｐ＜０．００５，＊＊戶＜０．０１，與?Ｓｈａｍ??組比較，ｎ?＝?６。??３．３?ＣＣＩ組及Ｓｈａｍ組小鼠ＤＲＧ中ＭＯＲ，ＤＮＭＴ３ａ及ＩＬ－６表達變??化??我們應用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ技術檢測ＣＣＩ組及Ｓｈａｍ組小鼠ＤＲＧ中ＭＯＲ和??ＤＮＭＴ３ａ蛋白的表達水平。正如先前的研究所證實的那樣［１６，２８］，與對照組相比，??小鼠外周神經(jīng)損傷后，損傷側ＤＲＧ中ＭＯＲ的表達顯著降低（ｐ＜０．０１，圖１．２Ａ，??Ｃ）。相反地，ＤＮＭＴ３ａ蛋白（圖１．２Ｂ，?Ｄ）和ＩＬ－６ｍＲＮＡ?（圖１．３）在損傷側ＤＲＧ??均明顯升高（／？＜０．０１）。免疫熒光顯示ＭＯＲ和ＤＮＭＴ３ａ與神經(jīng)元共定位，ＭＯＲ??主要分布于細胞膜上

ＭＯＲ的下調。我們通過鞘內注射ＤＮＡ甲基轉移酶抑制劑５－ａｚａ－ｄＣ抑制ＤＮＭＴ３ａ??的活性。與ＤＭＳＯ組相比，ＣＣＩ小鼠鞘內注射５－ａｚａ－ｄＣ后，損傷側ＤＲＧ中ＭＯＲ??的表達顯著增加（蘆＜０．０５，圖１．５Ａ，?Ｂ）?，?ＤＮＭＴ３ａ的表達明顯減少（ｐ＜０．０１，??圖１．５Ａ，?Ｃ）。正常小鼠鞘內注射５－ａｚａ－ｄＣ或ＤＭＳＯ對小鼠ＰＷＬ和ＰＷＴ均無影??響。ＣＣＩ模型小鼠鞘內注射５－ａｚａ－ｄＣ可以增強嗎啡的鎮(zhèn)痛效應（／？?＜０．０５，圖１．６）。??我們同時檢測了?ＤＲＧ中ＩＬ－６?ｍＲＮＡ的表達，發(fā)現(xiàn)給予５－ａｚａ－ｄＣ后ＤＲＧ中ＩＬ－６??ｍＲＮＡ并沒有明顯變化（圖１．７）。??２０??


本文編號：3146166