目的:神經(jīng)病理性疼痛是一種神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)損害或功能障礙引起的慢性疼痛疾病,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。多種不同的損傷,如外傷、神經(jīng)損傷或感染都可引起神經(jīng)病理性疼痛。研究顯示,表觀遺傳學(xué)機(jī)制參與神經(jīng)病理性疼痛,且神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的相互作用可能是疼痛慢性化的關(guān)鍵。神經(jīng)損傷后DRG內(nèi)MOR基因啟動(dòng)子區(qū)受到DNA甲基化修飾的調(diào)控,MOR表達(dá)降低,減少阿片藥物的作用靶點(diǎn),使阿片藥物對(duì)神經(jīng)病理性疼痛小鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)降低。IL-6可通過(guò)上調(diào)DNMT的表達(dá)促進(jìn)多種抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化增強(qiáng),抑制多種抑癌基因的表達(dá)。多項(xiàng)研究表明,IL-6可能在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。因此,我們提出以下假說(shuō):外周神經(jīng)損傷引起IL-6表達(dá)上調(diào),并與IL-6R結(jié)合,激活I(lǐng)L-6經(jīng)典信號(hào)通路,上調(diào)DNMT3a的表達(dá),促進(jìn)初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元MOR基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化,使MOR蛋白表達(dá)降低并減弱嗎啡的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。本課題旨在確定坐骨神經(jīng)損傷后的神經(jīng)病理性疼痛模型DRG中涉及神經(jīng)免疫相互作用的內(nèi)源性IL-6和MOR之間的關(guān)系。方法:我們應(yīng)用分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)在動(dòng)物和細(xì)胞中進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn):第一部分:觀察CCI模型小鼠DRG中IL-6和DNM... 

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圖１．１?ＣＣＩ組及Ｓｈａｍ組小鼠術(shù)后７天痛行為學(xué)

Ｔｉｍｅ?ａｆｔｅｒ?ｓｕｒｇｅｒｙ?（ｄ）?Ｔｉｍｅ?ａｆｔｅｒ?ｓｕｒｇｅｒｙ?（ｄ）??圖１．１?ＣＣＩ組及Ｓｈａｍ組小鼠術(shù)后７天痛行為學(xué)。兩組均在造模前及造模后１天，??３?天，５?天，７?天測(cè)量?ＰＷＬ?（Ａ）和?ＰＷＴ?（Ｂ）。＊Ｐ＜０．００５，＊＊戶＜０．０１，與?Ｓｈａｍ??組比較，ｎ?＝?６。??３．３?ＣＣＩ組及Ｓｈａｍ組小鼠ＤＲＧ中ＭＯＲ，ＤＮＭＴ３ａ及ＩＬ－６表達(dá)變??化??我們應(yīng)用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ技術(shù)檢測(cè)ＣＣＩ組及Ｓｈａｍ組小鼠ＤＲＧ中ＭＯＲ和??ＤＮＭＴ３ａ蛋白的表達(dá)水平。正如先前的研究所證實(shí)的那樣［１６，２８］，與對(duì)照組相比，??小鼠外周神經(jīng)損傷后，損傷側(cè)ＤＲＧ中ＭＯＲ的表達(dá)顯著降低（ｐ＜０．０１，圖１．２Ａ，??Ｃ）。相反地，ＤＮＭＴ３ａ蛋白（圖１．２Ｂ，?Ｄ）和ＩＬ－６ｍＲＮＡ?（圖１．３）在損傷側(cè)ＤＲＧ??均明顯升高（／？＜０．０１）。免疫熒光顯示ＭＯＲ和ＤＮＭＴ３ａ與神經(jīng)元共定位，ＭＯＲ??主要分布于細(xì)胞膜上

ＭＯＲ的下調(diào)。我們通過(guò)鞘內(nèi)注射ＤＮＡ甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑５－ａｚａ－ｄＣ抑制ＤＮＭＴ３ａ??的活性。與ＤＭＳＯ組相比，ＣＣＩ小鼠鞘內(nèi)注射５－ａｚａ－ｄＣ后，損傷側(cè)ＤＲＧ中ＭＯＲ??的表達(dá)顯著增加（蘆＜０．０５，圖１．５Ａ，?Ｂ）?，?ＤＮＭＴ３ａ的表達(dá)明顯減少（ｐ＜０．０１，??圖１．５Ａ，?Ｃ）。正常小鼠鞘內(nèi)注射５－ａｚａ－ｄＣ或ＤＭＳＯ對(duì)小鼠ＰＷＬ和ＰＷＴ均無(wú)影??響。ＣＣＩ模型小鼠鞘內(nèi)注射５－ａｚａ－ｄＣ可以增強(qiáng)嗎啡的鎮(zhèn)痛效應(yīng)（／？?＜０．０５，圖１．６）。??我們同時(shí)檢測(cè)了?ＤＲＧ中ＩＬ－６?ｍＲＮＡ的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)給予５－ａｚａ－ｄＣ后ＤＲＧ中ＩＬ－６??ｍＲＮＡ并沒(méi)有明顯變化（圖１．７）。??２０??


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