目的:膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（Glioblastoma,GBM）是神經(jīng)上皮源性腫瘤,按照WHO病理分級,GBM是惡性程度最高,侵襲性最強(qiáng)的惡性腦膠質(zhì)瘤。盡管給予積極的手術(shù)治療,并輔助術(shù)后放療和化療,GBM患者的5年生存率仍小于5%,預(yù)后很差。GBM對化療的耐藥性和放療的抵抗性是影響療效的重要因素。目前,研究者們從基因組學(xué)、遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)等多角度研究膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的發(fā)病機(jī)制,針對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)病機(jī)制的研究已成為診斷和靶向治療的關(guān)鍵。非編碼RNAs（non-coding RNAs,ncRNAs）人類基因組中的多數(shù)基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物之一。一般分為短鏈非編碼RNAs和長鏈非編碼RNAs（long non-coding RNAs,lncRNAs）。其中,短鏈非編碼RNAs主要包括microRNAs（miRNAs）、short-interfering RNAs（siRNAs）和PIWI-interacting RNAs（piRNAs）。piRNAs一般通過與Argonaute蛋白家族的亞家族,即PIWIL蛋白亞家族結(jié)合,發(fā)揮基因沉默及調(diào)控和維持種系DNA穩(wěn)定的功能。LncRNAs的生物學(xué)功能主要表現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄或者... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 PIWIL3/OIP5-AS1/miR-367-3p/CEBPA反饋環(huán)調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 細(xì)胞株
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
            2.2.2 細(xì)胞凍存
            2.2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.2.4 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
            2.2.5 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
            2.2.6 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
            2.2.8 Trizol法提取RNA
            2.2.9 Real-time PCR方法分別檢測OIP5-AS1、CEBPA和 TRAF4 mRNA的表達(dá)變化
            2.2.10 慢病毒載體構(gòu)建和感染
            2.2.11 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.12 雙熒光素酶報(bào)告基因分析實(shí)驗(yàn)
            2.2.13 RNA免疫沉淀技術(shù)（RIP）
            2.2.14 RNA pull-down實(shí)驗(yàn)
            2.2.15 Western blot方法
            2.2.16 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)
            2.2.17 裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)
        2.3 統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中PIWIL3和piR-30188 低表達(dá),OIP5-AS1 高表達(dá)。過表達(dá)PIWIL3、piR-30188 以及沉默OIP5-AS1 的表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為
        3.2 PIWIL3 結(jié)合piR-30188,OIP5-AS1 靶向結(jié)合piR-30188 調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為。miR-367-3p在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中低表達(dá),miR-367-3p靶向結(jié)合OIP5-AS1 調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為
        3.3 PIWIL3、piR-30188、OIP5-AS1和miR-367-3p通過調(diào)控CEBPA和TRAF4影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為
        3.4 沉默OIP5-AS1 的表達(dá)聯(lián)合過表達(dá)miR-367-3p通過降低CEBPA和 TRAF4的表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為
        3.5 CEBPA與 TRAF4 的啟動(dòng)子結(jié)合下調(diào)其表達(dá),調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為
        3.6 miR-367-3p靶向結(jié)合CEBPA的3’UTR區(qū),調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為
        3.7 CEBPA與 PIWIL3 的啟動(dòng)子區(qū)直接結(jié)合
        3.8 沉默OIP5-AS1 的表達(dá)與過表達(dá)PIWIL3、miR-367-3p的單獨(dú)和聯(lián)合應(yīng)用抑制裸鼠移植瘤生長,顯著延長生存期
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 TDP43/SNHG12/miR-195/SOX5 反饋環(huán)調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 細(xì)胞株
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.3 組織標(biāo)本
            2.1.4 主要試劑
            2.1.5 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
            2.2.2 細(xì)胞凍存
            2.2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
            2.2.4 熒光原位雜交（FISH）
            2.2.5 逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）
            2.2.6 Western blot
            2.2.7 構(gòu)建轉(zhuǎn)染細(xì)胞系
            2.2.8 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
            2.2.9 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.2.11 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
            2.2.12 雙熒光素酶報(bào)告基因分析實(shí)驗(yàn)
            2.2.13 RNA免疫沉淀技術(shù)（RIP）
            2.2.14 RNA pull-down實(shí)驗(yàn)
            2.2.15 半衰期檢測
            2.2.16 染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（ChIP）
            2.2.17 裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)
        2.3 統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 TDP43和SNHG12 在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中高表達(dá),沉默TDP43和SNHG12抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為,沉默TDP43 抑制SNHG12 的表達(dá)
        3.2 過表達(dá)miR-195 抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡
        3.3 miR-195與SNHG12 靶向結(jié)合,過表達(dá)miR-195 抑制SNHG12 的表達(dá)
        3.4 過表達(dá)miR-195 增強(qiáng)sh-SNHG12 對膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的抑制作用
        3.5 SOX5 在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中高表達(dá),沉默SOX5 抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為
        3.6 miR-195 靶向結(jié)合SOX5的3'UTR并負(fù)性調(diào)控其表達(dá)
        3.7 低表達(dá)SOX5 能夠部分逆轉(zhuǎn)沉默miR-195 的表達(dá)對膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的促進(jìn)作用
        3.8 SOX5與Gelsolin的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合,沉默SOX5 抑制Gelsolin的表達(dá)
        3.9 SOX5與SNHG12 的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合,沉默SOX5 抑制SNHG12 的表達(dá)
        3.10 沉默TDP43 表達(dá)、沉默SNHG12 表達(dá)和過表達(dá)miR-195 單獨(dú)以及聯(lián)合應(yīng)用抑制腫瘤在體內(nèi)的生長并延長裸鼠生存期
    4 討論
    5 結(jié)論
    本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]lncRNA:腫瘤分子診斷中的一顆新星[J]. 李琪兒,葉國良,郭俊明.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2014(03)
[2]轉(zhuǎn)錄因子與microRNA在基因表達(dá)調(diào)控中的功能聯(lián)系及差異[J]. 閆曉紅,王寧.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2010(10)
[3]小干擾RNA逆轉(zhuǎn)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7多藥耐藥的體外研究[J]. 莊曉明,肖紅,武卓.  中國臨床藥理學(xué)雜志. 2010(01)
[4]特異性小干擾RNA沉默Annexin Ⅱ基因表達(dá)對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231侵襲遷移力的影響[J]. 郭變琴,文陽安,陳婷梅.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(08)

博士論文
[1]長鏈非編碼RNA DMTF1v4（NR024549）在胃癌多藥耐藥中的作用及機(jī)制研究[D]. 王穎.第四軍醫(yī)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3142023