目的:探討應(yīng)用RNA干擾技術(shù)敲除波形蛋白（Vimentin,VIM）,在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)方面的作用,同時(shí)也為今后對(duì)于膠質(zhì)瘤疾病的靶向基因治療等方面提供相應(yīng)的理論依據(jù)。方法:首先利用siRNA（Small interfering RNA,小干擾RNA）設(shè)計(jì)原則合成VIM干擾RNA的真核表達(dá)載體,同時(shí)進(jìn)行測(cè)序予以證實(shí)。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中利用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染合成成功的真核表達(dá)載體到膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞株。利用RT-qPCR（Reverse transcription–qPCR,反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR）方法檢測(cè)U251細(xì)胞經(jīng)VIM RNAi（RNA interference,RNA干擾）干擾后VIM的mRNA表達(dá)量。將波形蛋白干擾組設(shè)為實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組為轉(zhuǎn)染siRNA陰性對(duì)照序列組。最后分別采用MTT法、細(xì)胞劃痕試驗(yàn)及Transwell小室侵襲試驗(yàn)的方法,觀察干擾后腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的改變,實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比,從而得出一定的結(jié)論。結(jié)果:1、成功合成出VIM干擾RNA真核表達(dá)載體,并通過檢驗(yàn)符合GeneBank數(shù)據(jù)庫序列,并采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染進(jìn)入至培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

載體設(shè)計(jì)圖譜

VIM-siRNA質(zhì)粒表達(dá)載體部分測(cè)序圖

圖 3ab 轉(zhuǎn)染后的 U251 細(xì)胞（熒光顯微鏡 200×）波形蛋白后 U251 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平變化擴(kuò)增曲線呈“S”形且與其要求的四階段一致，表明其有效擴(kuò)增；熔解物與其特異性結(jié)合，結(jié)果有一定意義。（見圖 4）圖 4 波形蛋白的擴(kuò)增曲線及熔解曲線組細(xì)胞使用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè) VIM mRNA 相對(duì)定量，48 小時(shí) VIM mRNA 轉(zhuǎn)錄水平為 0.89±0.07，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株 VIM mRNA 表

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3110260