發(fā)布時間：2021-03-30 22:24

　　目的:探討應(yīng)用RNA干擾技術(shù)敲除波形蛋白（Vimentin,VIM）,在人腦膠質(zhì)瘤細胞中表達及其對細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)方面的作用,同時也為今后對于膠質(zhì)瘤疾病的靶向基因治療等方面提供相應(yīng)的理論依據(jù)。方法:首先利用siRNA（Small interfering RNA,小干擾RNA）設(shè)計原則合成VIM干擾RNA的真核表達載體,同時進行測序予以證實。在細胞實驗中利用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染合成成功的真核表達載體到膠質(zhì)瘤U251細胞株。利用RT-qPCR（Reverse transcription–qPCR,反轉(zhuǎn)錄實時定量PCR）方法檢測U251細胞經(jīng)VIM RNAi（RNA interference,RNA干擾）干擾后VIM的mRNA表達量。將波形蛋白干擾組設(shè)為實驗組,對照組為轉(zhuǎn)染siRNA陰性對照序列組。最后分別采用MTT法、細胞劃痕試驗及Transwell小室侵襲試驗的方法,觀察干擾后腫瘤細胞生長、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的改變,實驗結(jié)果進行對比,從而得出一定的結(jié)論。結(jié)果:1、成功合成出VIM干擾RNA真核表達載體,并通過檢驗符合GeneBank數(shù)據(jù)庫序列,并采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染進入至培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤細胞... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

載體設(shè)計圖譜

VIM-siRNA質(zhì)粒表達載體部分測序圖

圖 3ab 轉(zhuǎn)染后的 U251 細胞（熒光顯微鏡 200×）波形蛋白后 U251 細胞轉(zhuǎn)錄水平變化擴增曲線呈“S”形且與其要求的四階段一致，表明其有效擴增；熔解物與其特異性結(jié)合，結(jié)果有一定意義。（見圖 4）圖 4 波形蛋白的擴增曲線及熔解曲線組細胞使用實時熒光定量 PCR 檢測 VIM mRNA 相對定量，48 小時 VIM mRNA 轉(zhuǎn)錄水平為 0.89±0.07，實驗組細胞株 VIM mRNA 表

【參考文獻】：
期刊論文
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[4]RNA干擾作用的機制及其在腫瘤基因治療中的應(yīng)用前景[J]. 張云漢.  鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2006(03)



本文編號：3110260