本文關(guān)鍵詞：FOXG1的表達(dá)與人惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:最近的證據(jù)表明,FOXG1表達(dá)的增加與腫瘤發(fā)生相關(guān)。本研究旨在探討FOXG1在人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤的表達(dá)及作用。方法:特定的短發(fā)卡RNA在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系下調(diào)FOXG1,FOXG1在增殖和凋亡的功能評(píng)估。我們通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)FOXG1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織樣本的表達(dá)。我們分析了FOXG1轉(zhuǎn)導(dǎo)的FOXG1 shRNA的慢病毒通過(guò)Western印跡分析U118細(xì)胞FOXG1表達(dá)并觀察一個(gè)顯著抑制FOXG1表達(dá)。采用了膜聯(lián)蛋白V/7-AAD染色流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行測(cè)定凋亡率。RT-PCR檢測(cè)兩組中FOXG1的表達(dá)。結(jié)果:與對(duì)照組大腦組織相比,神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織表現(xiàn)出明顯高表達(dá)FOXG1。FOXG1與組織學(xué)惡性度呈正相關(guān)。為了確認(rèn)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡的FOXG1功能,實(shí)驗(yàn)表明凋亡率在shFOXG1 U118細(xì)胞24小時(shí)(20.7%)和48小時(shí)(45.5%)相比,矢量控制組(1.1%和2.1%)相比顯著升高。因此,我們的研究結(jié)果表明,FOXG1下調(diào)的U118細(xì)胞增殖和存活,并誘導(dǎo)凋亡作用,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。U118細(xì)胞增殖是由于FOXG1干擾顯著下降。這些結(jié)果表明,FOXG1蛋白可能參與細(xì)胞增殖和凋亡途徑的調(diào)節(jié)。U118細(xì)胞的FOXG1表達(dá)在mRNA和蛋白水平相比于正常的人腦膠質(zhì)細(xì)胞HEB具有較強(qiáng)的表達(dá)。結(jié)論:我們的結(jié)果表明,高表達(dá)的FOXG1轉(zhuǎn)錄因子高度表達(dá)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤,并與組織學(xué)類型膠質(zhì)瘤相關(guān)聯(lián)。我們的研究結(jié)果還表明,高表達(dá)的FOXG1可促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和存活。靶向FOXG1可能是一種有吸引力的檢測(cè)和治療腦膠質(zhì)瘤方案。
【關(guān)鍵詞】：FOXG1 膠質(zhì)瘤 表達(dá) 凋亡
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-10
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料10-12
• 1.1 主要材料10-12
• 1.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器10-11
• 1.1.2 菌株與細(xì)胞株11
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑11-12
• 第二章 主要實(shí)驗(yàn)方法12-26
• 2.1 重組質(zhì)粒的擴(kuò)增、提取及鑒定12-14
• 2.1.1 重組質(zhì)粒的擴(kuò)增12
• 2.1.2 重組質(zhì)粒的提取12-13
• 2.1.3 重組質(zhì)粒的鑒定13-14
• 2.2 U118細(xì)胞的培養(yǎng)14-17
• 2.2.1 U118細(xì)胞的復(fù)蘇15
• 2.2.2 U118細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代15
• 2.2.3 U118細(xì)胞的凍存15
• 2.2.4 U118細(xì)胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率的測(cè)定15-16
• 2.2.4.1 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染流程15-16
• 2.2.4.2 轉(zhuǎn)染效率的測(cè)定16
• 2.2.5 G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系16-17
• 2.2.5.1 確定G418最佳篩選濃度16
• 2.2.5.2 篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系16-17
• 2.3 免疫組織化學(xué)17-18
• 2.4 RT-PCR反應(yīng)18-20
• 2.4.1 總RNA提取19
• 2.4.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)19-20
• 2.4.3 PCR反應(yīng)20
• 2.5 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖20-21
• 2.6 Western Blot21-24
• 2.6.1 提取細(xì)胞總蛋白21
• 2.6.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳21-22
• 2.6.3 電轉(zhuǎn)印22-23
• 2.6.4 封閉23
• 2.6.5 孵育抗體23-24
• 2.6.6ECL化學(xué)發(fā)光24
• 2.7 功能檢測(cè)24-25
• 2.7.1 U118細(xì)胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的建立24
• 2.7.2 采用RT-PCR和Western-Biot方法檢各組細(xì)胞U118的表達(dá)24
• 2.7.3 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖24
• 2.7.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡24-25
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-34
• 3.1 重組質(zhì)粒的鑒定26
• 3.2 U118細(xì)胞的培養(yǎng)26
• 3.3 U118脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染26-27
• 3.3.1 FOXG1干擾質(zhì)粒U118細(xì)胞26-27
• 3.4 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染U118細(xì)胞系的篩選27
• 3.5 MTT檢測(cè)U118細(xì)胞增殖27-28
• 3.6 Western-Blot檢測(cè)FOXG1的表達(dá)28-29
• 3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)U118細(xì)胞凋亡29-30
• 3.8 RT-PCR檢測(cè)FOXG1基因的表達(dá)30-31
• 3.9 免疫組化對(duì)FOXG1基因的檢測(cè)表達(dá)31-34
• 討論34-35
• 結(jié)論35-36
• 附錄36-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 綜述41-48
• 綜述參考文獻(xiàn)45-48
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果48-49
• 縮略語(yǔ)表49-50
• 致謝50-51

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