腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤是最常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤,國(guó)內(nèi)統(tǒng)計(jì)腦腫瘤中膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)病率最高。MRTF-A是血清反應(yīng)因子（SRF）的協(xié)同轉(zhuǎn)錄因子,它與SRF相互作用進(jìn)一步調(diào)控啟動(dòng)子上含有CArG bo位點(diǎn)的下游基因的轉(zhuǎn)錄。對(duì)MRTF-A參與腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤分化進(jìn)行研究,具有重要的基礎(chǔ)理論研究意義和臨床防治的現(xiàn)實(shí)價(jià)值。本論文利用細(xì)胞、分子生物學(xué)等技術(shù),對(duì)MRTF-A參與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的分化進(jìn)行研究。主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下利用免疫熒光和RT-PCR法,證實(shí)分離獲得的細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志基因膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）,說(shuō)明分離獲得的細(xì)胞為大鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。我們分別提取正常大鼠膠質(zhì)細(xì)胞與大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞（C6細(xì)胞）的mRNA和蛋白,進(jìn)行RT-PCR和Western blotting,檢測(cè)其中MRTF-A、Egr-1、GFAP和Ki67（細(xì)胞增殖抗原）基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常膠質(zhì)細(xì)胞相比,腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞高表達(dá)Ki67,低表達(dá)MRTF-A、Egr-1、GFAP。利用含有5個(gè)CArG box位點(diǎn)的Egr-1啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒,在COS-7細(xì)胞和C6細(xì)胞中進(jìn)行熒光素酶報(bào)告活性分析,結(jié)果發(fā)... 

【文章來(lái)源】：天津科技大學(xué)天津市

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
1 前言
    1.1 腦膠質(zhì)瘤的概況
        1.1.1 腦膠質(zhì)瘤的簡(jiǎn)介
        1.1.2 腦膠質(zhì)瘤的特征
        1.1.3 腦膠質(zhì)瘤的病因
        1.1.4 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞
        1.1.5 腦膠質(zhì)瘤的危害
    1.2 MRTF-A及其與腦膠質(zhì)瘤的關(guān)系
        1.2.1 MRTF-A和MRTFs簡(jiǎn)介
        1.2.2 MRTF-A的表達(dá)模式
        1.2.3 MRTF-A的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.2.4 MRTF-A與腫瘤等疾病的關(guān)系
        1.2.5 MRTF-A與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化的關(guān)系
    1.3 Egr-1
        1.3.1 Egr-1概況
        1.3.2 Egr-1的表達(dá)
        1.3.3 Egr-1基因定位
        1.3.4 Egr-1的特點(diǎn)
        1.3.5 Egr-1與其信號(hào)通路
        1.3.6 Egr-1與細(xì)胞分化的關(guān)系
        1.3.7 Egr-1與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化的關(guān)系
    1.4 ATRA與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化的關(guān)系
    1.5 本論文的研究意義及主要研究?jī)?nèi)容
        1.5.1 研究目的及意義
        1.5.2 研究的主要內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、質(zhì)粒和細(xì)胞
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 主要溶液的配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 SD新生大鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)與純化
        2.2.2 C6細(xì)胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)
        2.2.3 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）
        2.2.4 質(zhì)粒的大提制備
        2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.6 熒光素酶（luciferase）活性檢測(cè)
        2.2.7 免疫細(xì)胞化學(xué)
        2.2.8 細(xì)胞蛋白的提取
        2.2.9 Western blot（蛋白質(zhì)免疫印跡）
        2.2.10 MTT方法
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)分析方法
3 結(jié)果與討論
    3.1 新生SD大鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的分離純化
    3.2 復(fù)蘇與培養(yǎng)C6細(xì)胞
    3.3 C6與R-PG中GFAP、Ki67、MRTF-A和Egr-1的表達(dá)情況
    3.4 MRTF-A激活Egr-1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的研究
    3.5 MRTF-A誘導(dǎo)C6分化
        3.5.1 MRTF-A對(duì)C6細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響
        3.5.2 免疫化學(xué)方法驗(yàn)證MRTF-A可上調(diào)GFAP蛋白的表達(dá)
        3.5.3 MRTF-A促進(jìn)GFAP的mRNA水平、降低Ki67的mRNA水平
        3.5.4 MRTF-A升高GFAP的蛋白水平、降低Ki67的蛋白水平
    3.6 MRTF-A激活Egr-1誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化的研究
        3.6.1 在MRTF-A誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化過(guò)程中Egr-1mRNA水平升高
        3.6.2 在MRTF-A誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化過(guò)程中Egr-1蛋白水平升高
    3.7 MRTF-A對(duì)分化的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞存活的影響
4 結(jié)論
5 展望
6 參考文獻(xiàn)
7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況
8 致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3101708