背景膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,且極易腦內(nèi)轉(zhuǎn)移,為根治性切除及有效的局部放療帶來(lái)極大困難。腫瘤細(xì)胞代謝及相關(guān)代謝酶的變化已證明與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。雖然TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)顯示,乙酰輔酶A羧化酶1（Acetyl-CoA carboxylation1,ACC1）mRNA在膠質(zhì)瘤表達(dá)水平較正常腦組織顯著降低,但ACC1如何影響膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展尚未見報(bào)道。本文旨在探討ACC1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響及其可能的機(jī)制,為膠質(zhì)瘤細(xì)胞的能量代謝與腫瘤發(fā)生發(fā)展間的關(guān)系提供更全面的理論基礎(chǔ)。目的本研究通過敲低膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251中ACC1,闡明ACC1與膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲的相關(guān)性,為認(rèn)識(shí)細(xì)胞的能量代謝與膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展間的關(guān)系提供新視角。方法選擇人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞系。首先,通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)敲低U251細(xì)胞中的ACC1,并通過Transwell遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低ACC1后對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲的影響;通過Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)相關(guān)遷移和侵襲蛋白Vimentin,Fibronectin及uPA的表達(dá)水平;然后,通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞中活性氧（Reactive oxygen ... 

【文章來(lái)源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

敲低ACC1促進(jìn)U251細(xì)胞的遷移和侵襲能力

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文35不同視野中的遷移細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，y軸代表來(lái)自3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的遷移細(xì)胞數(shù)，x軸代表不同的細(xì)胞；圖1E，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞在包被了BDMatrigel基質(zhì)膠的24孔板培養(yǎng)24h后，用4%多聚甲醛固定，結(jié)晶紫染色后在倒置顯微鏡下觀察侵襲的細(xì)胞，并選擇5個(gè)不同的視野進(jìn)行拍照，圖中所示為侵襲細(xì)胞的相差顯微鏡圖像；圖1F，對(duì)5個(gè)不同視野中的遷移細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，y軸代表來(lái)自3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的遷移細(xì)胞數(shù)，x軸代表不同的細(xì)胞；圖1G，劃痕實(shí)驗(yàn)，觀察在不同的時(shí)間點(diǎn)U251細(xì)胞的劃痕愈合能力；圖1H，對(duì)遷移到劃痕區(qū)域的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，y軸代表來(lái)自3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的遷移細(xì)胞數(shù)，x軸代表不同的時(shí)間點(diǎn)。Bar=100μm。圖1B，D，F(xiàn)和H中的數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P**＜0.01。圖2敲低ACC1的U251細(xì)胞相關(guān)遷移和侵襲蛋白及H3K9ac表達(dá)增加。注：圖2A，Westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)相關(guān)蛋白ACC1、Vimentin、Fibronectin和uPA的表達(dá)，GAPDH被用作樣品的加樣對(duì)照；圖2B為蛋白灰度值統(tǒng)計(jì)結(jié)果，y軸代表相對(duì)蛋白表達(dá)量，x軸代表不同的蛋白。圖2C，Westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H3K9ac蛋白表達(dá)，GAPDH被用作樣品的加樣對(duì)照；圖2D為蛋白灰度值統(tǒng)計(jì)結(jié)果，y軸代表相對(duì)蛋白表達(dá)量。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P**＜0.01。

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文36圖3敲低ACC1的U251細(xì)胞中ROS水平增加。注：圖3A，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)敲低ACC1的U251細(xì)胞中ROS的水平；圖3B為熒光強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)結(jié)果，y軸代表平均熒光強(qiáng)度。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P*＜0.05。圖4抗氧化劑NAC可以使敲低ACC1的U251細(xì)胞中ROS水平降低。注：圖4A，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NAC作用后敲低ACC1的U251細(xì)胞中ROS的水平；圖4B為熒光強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)結(jié)果，y軸代表平均熒光強(qiáng)度。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，與對(duì)照組相比P*＜0.05，與敲低ACC1組相比P#＜0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Oxidative stress: the lowest common denominator of multiple diseases[J]. Veronika Matschke,Carsten Theiss,Johann Matschke.  Neural Regeneration Research. 2019(02)
[2]乙酰輔酶A羧化酶與惡性腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展[J]. 李妹,狄文.  上海醫(yī)學(xué). 2011(11)



本文編號(hào)：3099766