敲低ACC1在膠質(zhì)瘤細胞遷移侵襲中的作用及其機制研究
發(fā)布時間：2021-03-25 13:28
背景膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,且極易腦內(nèi)轉(zhuǎn)移,為根治性切除及有效的局部放療帶來極大困難。腫瘤細胞代謝及相關(guān)代謝酶的變化已證明與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。雖然TCGA數(shù)據(jù)庫顯示,乙酰輔酶A羧化酶1（Acetyl-CoA carboxylation1,ACC1）mRNA在膠質(zhì)瘤表達水平較正常腦組織顯著降低,但ACC1如何影響膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展尚未見報道。本文旨在探討ACC1對膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲的影響及其可能的機制,為膠質(zhì)瘤細胞的能量代謝與腫瘤發(fā)生發(fā)展間的關(guān)系提供更全面的理論基礎(chǔ)。目的本研究通過敲低膠質(zhì)瘤細胞U251中ACC1,闡明ACC1與膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲的相關(guān)性,為認識細胞的能量代謝與膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展間的關(guān)系提供新視角。方法選擇人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細胞系。首先,通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)敲低U251細胞中的ACC1,并通過Transwell遷移/侵襲實驗及劃痕實驗檢測敲低ACC1后對細胞遷移和侵襲的影響;通過Western blot實驗檢測相關(guān)遷移和侵襲蛋白Vimentin,Fibronectin及uPA的表達水平;然后,通過流式細胞儀檢測細胞中活性氧（Reactive oxygen ...
【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省
【文章頁數(shù)】：71 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
敲低ACC1促進U251細胞的遷移和侵襲能力
新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文35不同視野中的遷移細胞進行計數(shù)，y軸代表來自3次獨立實驗的遷移細胞數(shù)，x軸代表不同的細胞；圖1E，Transwell侵襲實驗，細胞在包被了BDMatrigel基質(zhì)膠的24孔板培養(yǎng)24h后，用4%多聚甲醛固定，結(jié)晶紫染色后在倒置顯微鏡下觀察侵襲的細胞，并選擇5個不同的視野進行拍照，圖中所示為侵襲細胞的相差顯微鏡圖像；圖1F，對5個不同視野中的遷移細胞進行計數(shù)，y軸代表來自3次獨立實驗的遷移細胞數(shù)，x軸代表不同的細胞；圖1G，劃痕實驗，觀察在不同的時間點U251細胞的劃痕愈合能力；圖1H，對遷移到劃痕區(qū)域的細胞進行計數(shù)，y軸代表來自3次獨立實驗的遷移細胞數(shù)，x軸代表不同的時間點。Bar=100μm。圖1B，D，F(xiàn)和H中的數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P**＜0.01。圖2敲低ACC1的U251細胞相關(guān)遷移和侵襲蛋白及H3K9ac表達增加。注：圖2A，Westernblot實驗檢測相關(guān)蛋白ACC1、Vimentin、Fibronectin和uPA的表達，GAPDH被用作樣品的加樣對照；圖2B為蛋白灰度值統(tǒng)計結(jié)果，y軸代表相對蛋白表達量，x軸代表不同的蛋白。圖2C，Westernblot實驗檢測H3K9ac蛋白表達，GAPDH被用作樣品的加樣對照；圖2D為蛋白灰度值統(tǒng)計結(jié)果，y軸代表相對蛋白表達量。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P**＜0.01。
新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文36圖3敲低ACC1的U251細胞中ROS水平增加。注：圖3A，流式細胞術(shù)檢測敲低ACC1的U251細胞中ROS的水平；圖3B為熒光強度統(tǒng)計結(jié)果，y軸代表平均熒光強度。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P*＜0.05。圖4抗氧化劑NAC可以使敲低ACC1的U251細胞中ROS水平降低。注：圖4A，流式細胞術(shù)檢測NAC作用后敲低ACC1的U251細胞中ROS的水平；圖4B為熒光強度統(tǒng)計結(jié)果，y軸代表平均熒光強度。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，與對照組相比P*＜0.05，與敲低ACC1組相比P#＜0.05。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Oxidative stress: the lowest common denominator of multiple diseases[J]. Veronika Matschke,Carsten Theiss,Johann Matschke. Neural Regeneration Research. 2019(02)
[2]乙酰輔酶A羧化酶與惡性腫瘤相關(guān)性的研究進展[J]. 李妹,狄文. 上海醫(yī)學(xué). 2011(11)
本文編號：3099766
【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省
【文章頁數(shù)】：71 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
敲低ACC1促進U251細胞的遷移和侵襲能力
新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文35不同視野中的遷移細胞進行計數(shù)，y軸代表來自3次獨立實驗的遷移細胞數(shù)，x軸代表不同的細胞；圖1E，Transwell侵襲實驗，細胞在包被了BDMatrigel基質(zhì)膠的24孔板培養(yǎng)24h后，用4%多聚甲醛固定，結(jié)晶紫染色后在倒置顯微鏡下觀察侵襲的細胞，并選擇5個不同的視野進行拍照，圖中所示為侵襲細胞的相差顯微鏡圖像；圖1F，對5個不同視野中的遷移細胞進行計數(shù)，y軸代表來自3次獨立實驗的遷移細胞數(shù)，x軸代表不同的細胞；圖1G，劃痕實驗，觀察在不同的時間點U251細胞的劃痕愈合能力；圖1H，對遷移到劃痕區(qū)域的細胞進行計數(shù)，y軸代表來自3次獨立實驗的遷移細胞數(shù)，x軸代表不同的時間點。Bar=100μm。圖1B，D，F(xiàn)和H中的數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P**＜0.01。圖2敲低ACC1的U251細胞相關(guān)遷移和侵襲蛋白及H3K9ac表達增加。注：圖2A，Westernblot實驗檢測相關(guān)蛋白ACC1、Vimentin、Fibronectin和uPA的表達，GAPDH被用作樣品的加樣對照；圖2B為蛋白灰度值統(tǒng)計結(jié)果，y軸代表相對蛋白表達量，x軸代表不同的蛋白。圖2C，Westernblot實驗檢測H3K9ac蛋白表達，GAPDH被用作樣品的加樣對照；圖2D為蛋白灰度值統(tǒng)計結(jié)果，y軸代表相對蛋白表達量。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P**＜0.01。
新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文36圖3敲低ACC1的U251細胞中ROS水平增加。注：圖3A，流式細胞術(shù)檢測敲低ACC1的U251細胞中ROS的水平；圖3B為熒光強度統(tǒng)計結(jié)果，y軸代表平均熒光強度。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，P*＜0.05。圖4抗氧化劑NAC可以使敲低ACC1的U251細胞中ROS水平降低。注：圖4A，流式細胞術(shù)檢測NAC作用后敲低ACC1的U251細胞中ROS的水平；圖4B為熒光強度統(tǒng)計結(jié)果，y軸代表平均熒光強度。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD，與對照組相比P*＜0.05，與敲低ACC1組相比P#＜0.05。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Oxidative stress: the lowest common denominator of multiple diseases[J]. Veronika Matschke,Carsten Theiss,Johann Matschke. Neural Regeneration Research. 2019(02)
[2]乙酰輔酶A羧化酶與惡性腫瘤相關(guān)性的研究進展[J]. 李妹,狄文. 上海醫(yī)學(xué). 2011(11)
本文編號：3099766
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