本文關(guān)鍵詞：L-DOPA的細胞毒性及其機理研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究L-DOPA (Levodopa, L-DOPA)對神經(jīng)細胞增殖損傷影響及醌氧化還原酶(Quinone oxidoreductase, NQO1)對神經(jīng)細胞損傷的保護作用,進一步探究帕金森病發(fā)病機理及相關(guān)左旋多巴衰竭綜合癥防治方法。方法：運用MTT比色法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)檢測左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)對神經(jīng)母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)的增殖損傷影響,檢測利血平(Reserpine, RE)與不同濃度左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)共同作用對細胞毒性的影響以及蘿卜硫素(Sulforaphane, SF)對不同濃度左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)的細胞毒性影響的保護作用；運用醌蛋白檢測法(氯化硝基四氮唑藍NBT/甘氨酸法)檢測左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)、左旋多巴(L-DOPA)與利血平(RE)、左旋多巴(L-DOPA)與蘿卜硫素(SF)作用于SH-SY5Y細胞后醌化蛋白含量變化；運用蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)方法檢測蘿卜硫素(SF)作用SH-SY5Y細胞后,細胞內(nèi)NQO1的表達量變化；運用乳酸脫氫酶(LDH)還原NADH至NAD+, NADH在340nm有吸光值原理,用酶標儀檢測左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)作用SH-SY5Y細胞后乳酸脫氫酶酶活性變化。結(jié)果：左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)對SH-SY5Y細胞的毒性作用隨濃度的增大而對細胞毒性作用增強,在400μmol/L時SH-SY5Y細胞呈現(xiàn)明顯損傷,細胞內(nèi)醌化蛋白含量隨L-DOPA作用濃度增加而增加；左旋L-DOPA與利血平(Reserpine, RE)共同作用SH-SY5Y細胞,與相同劑量的單獨L-DOPA作用相比,對細胞的毒性作用增大,且細胞內(nèi)醌化蛋白含量隨之增加；L-DOPA作用SH-SY5Y細胞后,細胞內(nèi)乳酸脫氫酶酶活性下降；蘿卜硫素(Sulforaphane, SF)作用SH-SY5Y細胞后,會使胞內(nèi)NQO1表達量增加,緩解L-DOPA對細胞的毒性作用；SF預(yù)處理后與L-DOPA共同作用產(chǎn)生的醌蛋白含量,同L-DOPA單獨作用細胞所產(chǎn)生醌蛋白含量相比無明顯差異。結(jié)論：L-DOPA對SH-SY5Y細胞具有劑量依賴性的毒性效應(yīng),隨著L-DOPA濃度增加,SH-SY5Y細胞醌化蛋白含量增加,其引起的細胞毒性與胞內(nèi)醌化蛋白的形成呈一定程度的正相關(guān)性；利血平(Reserpine, RE)能夠加大L-DOPA的細胞毒性作用,并引起細胞醌蛋白含量進一步增加；L-DOPA能夠抑制乳酸脫氫酶活性,推澳L-DOPA作用細胞后使乳酸脫氫酶醌化,進而影響細胞氧化代謝,導致細胞損傷死亡；90μmol/L羥化酪醇(HT)對L-DOPA的細胞毒性影響未見明顯的保護作用；SF能誘導產(chǎn)生NQO1,在一定程度上起到對L-DOPA細胞毒性的保護作用。SF對于降低L-DOPA作用SH-SY5Y所產(chǎn)生的醌化蛋白含量并不顯著。
【關(guān)鍵詞】：SH-SY5Y L-DOPA NQO1 醌蛋白
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 第一章 L-DOPA對細胞毒性作用研究15-32
• 1 材料和方法17-23
• 1.1 實驗材料17-19
• 1.2 實驗方法19-23
• 2 結(jié)果23-30
• 2.1 L-DOPA對SH-SY5Y細胞的毒性影響23-25
• 2.2 L-DOPA作用SH-SY5Y細胞醌蛋白含量測定25-26
• 2.3 L-DOPA與RE共同作用對SH-SY5Y細胞的毒性作用26-27
• 2.4 L-DOPA與RE共同作用醌蛋白含量測定27-29
• 2.5 酶活性測定29-30
• 3 小結(jié)與討論30-32
• 第二章 對L-DOPA毒性作用的細胞保護研究32-48
• 1 材料和方法33-43
• 1.1 實驗材料33-37
• 1.2 實驗方法37-43
• 2 結(jié)果43-46
• 2.1 對于L-DOPA毒性作用保護藥物篩選43-44
• 2.2 SF對L-DOPA毒性作用保護MTT檢測44
• 2.3 NQO1蛋白表達量Western Blot檢測44-45
• 2.4 SH-SY5Y細胞醌蛋白含量NBT檢測45-46
• 3 小結(jié)與討論46-48
• 第三章 綜述48-52
• 1 帕金森病48
• 2 左旋多巴衰竭綜合癥48-49
• 3 羥基酪醇49-50
• 4 蘿卜硫素50
• 5 NQO150-52
• 參考文獻52-59
• 致謝59-60

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