本文關(guān)鍵詞：L-DOPA的細(xì)胞毒性及其機(jī)理研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究L-DOPA (Levodopa, L-DOPA)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞增殖損傷影響及醌氧化還原酶(Quinone oxidoreductase, NQO1)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,進(jìn)一步探究帕金森病發(fā)病機(jī)理及相關(guān)左旋多巴衰竭綜合癥防治方法。方法：運(yùn)用MTT比色法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)檢測(cè)左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)的增殖損傷影響,檢測(cè)利血平(Reserpine, RE)與不同濃度左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)共同作用對(duì)細(xì)胞毒性的影響以及蘿卜硫素(Sulforaphane, SF)對(duì)不同濃度左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)的細(xì)胞毒性影響的保護(hù)作用；運(yùn)用醌蛋白檢測(cè)法(氯化硝基四氮唑藍(lán)NBT/甘氨酸法)檢測(cè)左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)、左旋多巴(L-DOPA)與利血平(RE)、左旋多巴(L-DOPA)與蘿卜硫素(SF)作用于SH-SY5Y細(xì)胞后醌化蛋白含量變化；運(yùn)用蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)方法檢測(cè)蘿卜硫素(SF)作用SH-SY5Y細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)NQO1的表達(dá)量變化；運(yùn)用乳酸脫氫酶(LDH)還原NADH至NAD+, NADH在340nm有吸光值原理,用酶標(biāo)儀檢測(cè)左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)作用SH-SY5Y細(xì)胞后乳酸脫氫酶酶活性變化。結(jié)果：左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的毒性作用隨濃度的增大而對(duì)細(xì)胞毒性作用增強(qiáng),在400μmol/L時(shí)SH-SY5Y細(xì)胞呈現(xiàn)明顯損傷,細(xì)胞內(nèi)醌化蛋白含量隨L-DOPA作用濃度增加而增加；左旋L-DOPA與利血平(Reserpine, RE)共同作用SH-SY5Y細(xì)胞,與相同劑量的單獨(dú)L-DOPA作用相比,對(duì)細(xì)胞的毒性作用增大,且細(xì)胞內(nèi)醌化蛋白含量隨之增加；L-DOPA作用SH-SY5Y細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶酶活性下降；蘿卜硫素(Sulforaphane, SF)作用SH-SY5Y細(xì)胞后,會(huì)使胞內(nèi)NQO1表達(dá)量增加,緩解L-DOPA對(duì)細(xì)胞的毒性作用；SF預(yù)處理后與L-DOPA共同作用產(chǎn)生的醌蛋白含量,同L-DOPA單獨(dú)作用細(xì)胞所產(chǎn)生醌蛋白含量相比無(wú)明顯差異。結(jié)論：L-DOPA對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞具有劑量依賴性的毒性效應(yīng),隨著L-DOPA濃度增加,SH-SY5Y細(xì)胞醌化蛋白含量增加,其引起的細(xì)胞毒性與胞內(nèi)醌化蛋白的形成呈一定程度的正相關(guān)性；利血平(Reserpine, RE)能夠加大L-DOPA的細(xì)胞毒性作用,并引起細(xì)胞醌蛋白含量進(jìn)一步增加；L-DOPA能夠抑制乳酸脫氫酶活性,推澳L-DOPA作用細(xì)胞后使乳酸脫氫酶醌化,進(jìn)而影響細(xì)胞氧化代謝,導(dǎo)致細(xì)胞損傷死亡；90μmol/L羥化酪醇(HT)對(duì)L-DOPA的細(xì)胞毒性影響未見明顯的保護(hù)作用；SF能誘導(dǎo)產(chǎn)生NQO1,在一定程度上起到對(duì)L-DOPA細(xì)胞毒性的保護(hù)作用。SF對(duì)于降低L-DOPA作用SH-SY5Y所產(chǎn)生的醌化蛋白含量并不顯著。
【關(guān)鍵詞】：SH-SY5Y L-DOPA NQO1 醌蛋白
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 第一章 L-DOPA對(duì)細(xì)胞毒性作用研究15-32
• 1 材料和方法17-23
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 2 結(jié)果23-30
• 2.1 L-DOPA對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的毒性影響23-25
• 2.2 L-DOPA作用SH-SY5Y細(xì)胞醌蛋白含量測(cè)定25-26
• 2.3 L-DOPA與RE共同作用對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的毒性作用26-27
• 2.4 L-DOPA與RE共同作用醌蛋白含量測(cè)定27-29
• 2.5 酶活性測(cè)定29-30
• 3 小結(jié)與討論30-32
• 第二章 對(duì)L-DOPA毒性作用的細(xì)胞保護(hù)研究32-48
• 1 材料和方法33-43
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料33-37
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法37-43
• 2 結(jié)果43-46
• 2.1 對(duì)于L-DOPA毒性作用保護(hù)藥物篩選43-44
• 2.2 SF對(duì)L-DOPA毒性作用保護(hù)MTT檢測(cè)44
• 2.3 NQO1蛋白表達(dá)量Western Blot檢測(cè)44-45
• 2.4 SH-SY5Y細(xì)胞醌蛋白含量NBT檢測(cè)45-46
• 3 小結(jié)與討論46-48
• 第三章 綜述48-52
• 1 帕金森病48
• 2 左旋多巴衰竭綜合癥48-49
• 3 羥基酪醇49-50
• 4 蘿卜硫素50
• 5 NQO150-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 致謝59-60

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