發(fā)布時(shí)間：2021-03-17 21:15

　　目的:研究證實(shí),IKBKE蛋白表達(dá)量與膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別成正相關(guān),并且參與膠質(zhì)瘤的惡性進(jìn)展。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí),沉默IKBKE在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中明顯抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。本研究中,通過(guò)沉默或過(guò)表達(dá)IKBKE聯(lián)合替莫唑胺,探討在膠質(zhì)瘤耐藥治療中IKBKE的作用,為下一步應(yīng)用IKBKE特異性抑制劑聯(lián)合替莫唑胺治療膠質(zhì)瘤提供基礎(chǔ)。方法:選擇兩個(gè)經(jīng)典膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LN18和U118,然后相應(yīng)的沉默或過(guò)表達(dá)IKBKE,然后通過(guò)WB和RT-PCR驗(yàn)證處理后效果。應(yīng)用EDU及克隆實(shí)驗(yàn)方法,形成不同實(shí)驗(yàn)處理下替莫唑胺對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響;應(yīng)用transwell方法檢測(cè)替莫唑胺藥物對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系遷移及侵襲能力的影響。在機(jī)制研究中,通過(guò)免疫印跡的方法,沉默或過(guò)表達(dá)IKBKE后,檢測(cè)AKT/NF-KB信號(hào)通路的相應(yīng)蛋白的變化。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究中,選擇高表達(dá)IKBKE膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LN18,感染luciferase病毒;使用立體定向儀分別建立裸鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤模型,分為無(wú)意序列組、無(wú)意序列+替莫唑胺組、sh IKBKE組和sh IKBKE+替莫唑胺組;每7天應(yīng)用生物熒光成像儀檢測(cè)裸鼠顱內(nèi)熒光信號(hào),然后根據(jù)熒光信號(hào)值比較腫瘤大小,... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

多個(gè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中IKBKE蛋白和mRNA的表達(dá)量情況

圖1.1 多個(gè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中IKBKE蛋白和mRNA的表達(dá)量情況Fig. 1.1 expression of IKBKE protein and mRNA in multiple glioma ce根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，我們選擇 IKBKE 基因表達(dá)較高的 LN18對(duì)表達(dá)量低的 U118 細(xì)胞。LN18 細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染 IKBKE-shRNA 及 NC-病毒，構(gòu)建 LN18 shIKBKE 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組；U118 細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染 L及 LV-NC 慢病毒，構(gòu)建 U118 OE-IKBKE 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。然后嘌呤未轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞，提取細(xì)胞蛋白，然后應(yīng)用 WB 實(shí)驗(yàn)方法技術(shù)檢測(cè)對(duì)照組中 IKBKE 蛋白表達(dá)量變化情況；LN18 細(xì)胞系中，相對(duì)于對(duì)照組中 IKBKE 蛋白表達(dá)量顯著降低（圖 1.2）；在 U118 細(xì)胞系中，實(shí)驗(yàn)蛋白表達(dá)量顯著高于對(duì)照組。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果. 1.2 expression of IKBKE protein in sh-IKBKE,LV-IKBKE lentivirus cellsnsfected with LN18 and U118 cell lines, respectivelyRT-PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中IKBKE mRNA的變化情結(jié)果顯示：LN18 細(xì)胞系中，相較于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組 IKBKEmRNA 表達(dá)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.001）；在 U118 細(xì)胞系中，實(shí)驗(yàn)組 IKBNA 表達(dá)量顯著高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）（圖 1.3）。以顯示，IKBKE-shIKBKE 慢病毒和 LV-IKBKE 慢病毒干擾 IKBKE 效果明轉(zhuǎn)染效率高。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中表皮生長(zhǎng)因子受體和MGMT的改變及其與預(yù)后的關(guān)系[J]. 張立彥,葛海靜,王雷明,趙莉紅,劉莉,張德江,蔡彥寧,盧德宏,樸月善.  中華病理學(xué)雜志. 2019 (03)
[2]IKKε通過(guò)E-cadherin調(diào)控人腦膠質(zhì)瘤遷移和侵襲能力的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 周西廣,楊毅,路捷,南陽(yáng),甄英偉,俞凱,王廣秀,賈志凡,康春生,黃強(qiáng).  中華神經(jīng)外科雜志. 2016 (02)



本文編號(hào)：3087727