發(fā)布時(shí)間：2021-03-05 20:32

　　目的:探索腦缺血再灌注時(shí)自噬的作用及給予鹽酸戊乙奎醚對(duì)其的影響方法:清潔級(jí)SD大鼠54只,體重250-280g（蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）。隨機(jī)數(shù)字表法分為3組（n=18）:假手術(shù)組（Sham組）;缺血再灌注組（I/R組）;鹽酸戊乙奎醚組（PHC組）。I/R組與PHC組均使用線栓制作右腦中動(dòng)脈栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,按照Z(yǔ)ea Longa神經(jīng)功能缺失評(píng)分法1-3分界定為模型成功。缺血1.5 h后抽出線栓,Sham組在模型成功后1h從尾靜脈推注0.9%NS1ml;I/R組于腦血管再通前30分鐘從尾靜脈推注0.9%NS 1ml;PHC組同樣的時(shí)間點(diǎn)推注鹽酸戊乙奎醚0.2mg/kg稀釋到1ml。于再灌注后24h后分別再進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分;2%TTC染色腦組織測(cè)定含水率及梗死率;Western Blot法測(cè)自噬表達(dá)Beclinl、Atg5、LC3II/I;免疫熒光雙染色觀察海馬CA1區(qū)組織學(xué)變化,收集數(shù)據(jù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1、大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分:缺血1.5h后,I/R和PHC兩組神經(jīng)功能缺損評(píng)分均降低,與Sham組... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

再灌注24h腦缺血區(qū)域自噬相關(guān)產(chǎn)物的表達(dá)注：Beclin1、Atg5、LC3II/I均為自噬表達(dá)產(chǎn)物，aP表示與Sham組比較P<0.01，bP表示與I/R組比較P<0.01

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文鹽酸戊乙奎醚對(duì)缺血再灌注大鼠腦組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響24表5再灌注24h各組WB比較（n=3,X±SD）組別Sham組I/R組PHC組P-valueBeclin11.00±0.001.68±0.01a5.54±0.22ab<0.001Atg51.00±0.001.63±0.0612.49±0.68ab<0.001LC3II/I1.00±0.001.89±0.08a2.20±0.08ab<0.001注：aP表示與Sham組比較P<0.01，bP表示與I/R組比較P<0.014.4自噬相關(guān)蛋白的免疫熒光染色結(jié)果4.4.1再灌注24h后海馬CA1區(qū)Beclin1、Atg5表達(dá)的免疫熒光結(jié)果顯微鏡下觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)自噬表達(dá)產(chǎn)物的分布情況。Sham組Beclin1、Atg5均有低劑量表達(dá)（見圖5A-B）；與Sham組相比，I/R組Beclin1、Atg5表達(dá)增多（見圖5C-D），而PHC組較I/R組又增多（見圖5E-F）。圖5大鼠大腦海馬CA1區(qū)自噬相關(guān)產(chǎn)物Beclin1、Atg5的表達(dá)注：Beclin1(A、C、E)、Atg5(B、D、F)均由AlexaFluor488標(biāo)記，呈綠色。圖中Bar=100μm.4.4.2再灌注24h后海馬CA1區(qū)細(xì)胞結(jié)構(gòu)、核形態(tài)及數(shù)量Sham組可以看到CA1區(qū)錐體細(xì)胞核排列致密整齊,胞核飽滿、邊界清晰，ABCDEF

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文鹽酸戊乙奎醚對(duì)缺血再灌注大鼠腦組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響25有兩到三層細(xì)胞排列（見圖6）；I/R組細(xì)胞排列松散，大部分細(xì)胞核崩解，核形態(tài)異常，單位面積內(nèi)細(xì)胞核數(shù)銳減，與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，見表6，圖6）；PHC組細(xì)胞層次尚完整，部分細(xì)胞崩解，單位面積內(nèi)細(xì)胞核數(shù)有減少，與Sham組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，見表6，圖6）；但正常形態(tài)的細(xì)胞數(shù)多于I/R組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，見表6，圖6）。圖6大鼠大腦海馬CA1區(qū)細(xì)胞核形態(tài)注：各組DAPI染色細(xì)胞核，呈藍(lán)色。圖中Bar=10μm。

【參考文獻(xiàn)】：
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