目的:腦血管病是目前世界上影響人類健康,威脅生命的主要疾病之一。我國每年約有250萬新增腦血管病患者。與歐美相比,我國腦血管病發(fā)病率和死亡率遠(yuǎn)高于心血管疾病。缺血性卒中（ischemic stroke,IS）是指因腦部血液循環(huán)障礙,缺血、缺氧所致的局限性腦組織的缺血性壞死或軟化。缺血性卒中是腦血管病中的一大重要分類,約占我國腦血管病患者的80%,該病致殘致死率高,耗費(fèi)了大量的社會及醫(yī)療資源,同時給病患帶來了極大的身心痛苦。目前血管再通是缺血性卒中的核心治療手段。在有效時間窗內(nèi)進(jìn)行靜脈溶栓或機(jī)械取栓治療,可以挽救處于灌注臨界狀態(tài)的缺血半暗帶區(qū)細(xì)胞,從而減輕患者神經(jīng)功能障礙,降低致殘致死率,提高生存率,最終改善患者的生活質(zhì)量及預(yù)后。然而由于早期診斷條件和治療時間窗的限制,目前能夠接受血管再通治療的患者仍為少數(shù)。此外,缺血/再灌注損傷的發(fā)生導(dǎo)致治療效果并不理想。因此,在分子水平上探索一種的敏感且特異的有助于急性缺血性腦卒中早期診斷、治療以及評估預(yù)后的指標(biāo)是亟待解決的難題。缺血繼發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞死亡是腦卒中致殘致死的首要原因。腦缺血后氧糖消耗,維持細(xì)胞和組織正常結(jié)構(gòu)和功能的能量供應(yīng)減少,導(dǎo)致一系列... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :KCNQ1OT1 在急性缺血性腦卒中患者外周血中表達(dá)水平及意義
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)用人外周血標(biāo)本
            2.1.2 主要試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 臨床研究對象的基本信息及外周血血漿收集
            2.2.2 實(shí)時熒光定量PCR（qRT-PCR）
    3 結(jié)果
        3.1 急性缺血性腦卒中患者KCNQ1OT1 表達(dá)水平升高
        3.2 外周血血漿KCNQ1OT1 表達(dá)水平與患者急性腦卒中嚴(yán)重程度密切相關(guān)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :KCNQ1OT1 調(diào)控缺血再灌注損傷誘導(dǎo)自噬的分子機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物和細(xì)胞
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.4 主要溶液及試劑配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 小鼠短暫性大腦中動脈閉塞模型（Transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO）
            2.2.2 腦立體定位儀下側(cè)腦室注射
            2.2.3 神經(jīng)行為學(xué)評分
            2.2.4 腦梗死體積測量
            2.2.5 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代、凍存
            2.2.6 細(xì)胞氧糖剝奪-復(fù)氧（Oxygen and glucose deprivation and re-oxygenation,OGD/R）模型構(gòu)建
            2.2.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.8 實(shí)時熒光定量PCR（qRT-PCR）
            2.2.9 蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測FOXO3、ATG7、LC3B和SQSTM1 蛋白水平表達(dá)
            2.2.10 細(xì)胞活力檢測
            2.2.11 細(xì)胞凋亡檢測
            2.2.12 免疫熒光染色
            2.2.13 透射電鏡下觀察
            2.2.14 腺病毒轉(zhuǎn)染
            2.2.15 雙熒光素酶報告基因分析
            2.2.16 染色質(zhì)免疫共沉淀（CHIP）檢測
            2.2.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 tMCAO造模小鼠體內(nèi)KCNQ1OT1 表達(dá)水平上升
            3.1.1 tMCAO造模小鼠血漿KCNQ1OT1 表達(dá)水平上升
            3.1.2 tMCAO造模小鼠局部腦組織中KCNQ1OT1 表達(dá)水平上升
            3.1.3 tMCAO組小鼠血漿及局部腦組織中KCNQ1OT1 表達(dá)相關(guān)性
        3.2 MCAO造模小鼠局部腦組織自噬激活
        3.3 降低KCNQ1OT1 表達(dá)減輕tMCAO小鼠腦組織損傷且抑制自噬
            3.3.1 KCNQ1OT1 表達(dá)降低能夠減輕tMCAO小鼠腦組織損傷
            3.3.2 KCNQ1OT1 表達(dá)降低能夠抑制tMCAO小鼠腦組織中自噬
        3.4 KCNQ1OT1 通過調(diào)節(jié)自噬對OGD/R損傷的神經(jīng)元起保護(hù)作用
            3.4.1 KCNQ1OT1 通過調(diào)節(jié)自噬反應(yīng)影響OGD/R損傷的神經(jīng)元細(xì)胞活力
            3.4.2 KCNQ1OT1 通過調(diào)節(jié)自噬反應(yīng)影響OGD/R損傷的神經(jīng)元凋亡
        3.5 miR-200a促進(jìn)OGD/R損傷后神經(jīng)元存活
        3.6 KCNQ1OT1 表達(dá)降低通過上調(diào)miR-200a抑制自噬
            3.6.1 KCNQ1OT1 負(fù)性調(diào)控miR-200a表達(dá)
            3.6.2 KCNQ1OT1與miR-200a直接結(jié)合調(diào)控自噬
        3.7 FOXO3在OGD/R損傷的神經(jīng)元中上調(diào)并調(diào)節(jié)自噬
        3.8 miR-200a通過與FOXO33’-UTR區(qū)域靶向結(jié)合調(diào)控OGD/R損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)元自噬
            3.8.1 miR-200a調(diào)控OGD/R損傷后FOXO3 蛋白表達(dá)
            3.8.2 miR-200a通過靶向結(jié)合FOXO33’-UTR區(qū)域調(diào)控OGD/R誘導(dǎo)的自噬
        3.9 ATG7 參與OGD/R損傷后FOXO3 介導(dǎo)的自噬調(diào)節(jié)
            3.9.1 OGD/R損傷后ATG7 蛋白表達(dá)受到FOXO3 調(diào)節(jié)
            3.9.2 FOXO3 能夠靶向調(diào)控ATG7 蛋白表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Dynamic changes in neuronal autophagy and apoptosis in the ischemic penumbra following permanent ischemic stroke[J]. Yi-hao Deng,Hong-yun He,Li-qiang Yang,Peng-yue Zhang.  Neural Regeneration Research. 2016(07)
[2]Intermittent hypoxia attenuates ischemia/reperfusion induced apoptosis in cardiac myocytes via regulating Bcl-2/Bax expression[J]. JIAN WEN DONG, HAI FENG ZHU, WEI ZHONG ZHU, HAI LEI DING, TIE MIN MA, ZHAO NIAN ZHOU 1 Laboratory of Hypoxic Cardiovascular Physiology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China.2 Department of Physiology and Pathophysiology, Health Science Center Peking University, Beijing 100083 China.  Cell Research. 2003(05)



本文編號：3063082