背景糖尿病患者有較高發(fā)生認知功能障礙的風險,即糖尿病腦�。―E）。DE在臨床上主要表現(xiàn)為慢性腦部疾病,比如認知功能障礙、癡呆和精神障礙。Grb10（生長因子受體結(jié)合蛋白10）-相關(guān)的GYF蛋白1（GIGYF1）通過與銜接蛋白Grb10的連接可以調(diào)節(jié)胰島素生長因子1受體（IGF1R）信號通路,而IGF1R信號通路在調(diào)節(jié)糖尿病相關(guān)的認知功能障礙中扮演著重要的作用。目的初步探究GIGYF1的表達水平在高糖誘導(dǎo)的SHSY-5Y細胞中對IGF1R信號通路及對細胞功能的影響。方法用高糖誘導(dǎo)人類神經(jīng)母細胞瘤細胞SHSY-5Y細胞,并用GIGYF1-shRNA慢病毒敲低GIGYF1的表達水平。用Western blot和實時熒光定量PCR實驗分別檢測SHSY-5Y細胞的GIGYF1、Grb10和IGF1R的蛋白和mRNA的表達水平。用Western blot方法檢測磷酸化IGF1R/IGF1R、磷酸化AKT/AKT和磷酸化ERK/ERK的蛋白表達水平。同時,利用Annexin V/PI染色、EdU及細胞劃痕實驗檢測SHSY-5Y細胞的凋亡、增殖和遷移。結(jié)果SHSY-5Y細胞的凋亡隨著葡萄糖濃度（0-2... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

感染GIGYF1-shRNASHSY-5Y細胞的白光和熒光圖

圖 1 感染 GIGYF1-shRNA SHSY-5Y 細胞的白光和熒光圖Figure 1. White light and fluorescence of SHSY-5Y cells infected GIGYF1-shRNA virus.2 高糖誘導(dǎo)細胞凋亡并增加 GIGYF1 在 SHSY-5Y 細胞中的表達為了確定高糖對 SHSY-5Y 細胞活力的影響，我們將血清饑餓 1 天的 SHSY胞用不同劑量的葡萄糖或甘露醇(0-200mm)處理 48h 后，用 Annexin VFITC 法細胞凋亡率，以 0mM 濃度的葡萄糖或甘露醇作為對照組。結(jié)果表明，隨著葡或甘露醇濃度的增加，細胞凋亡率呈上升趨勢。此外，甘露醇誘導(dǎo)的細胞凋度明顯低于高糖誘導(dǎo)的細胞凋亡程度，且葡萄糖毒性高于甘露醇最為顯著時自的濃度為 50mM 時（圖 2A-C）。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 Annexin V-FITC/PI 染色檢測 SHSY-5Y 細胞凋亡;(B)在血清饑餓的 SHSY-5Y 細胞中加濃度的葡萄糖(0-200mm)誘導(dǎo) 48h 后，檢測 SHSY-5Y 細胞凋亡，方法與(A)相同;(C)分(A, B)中檢測到的 SHSY-5Y 細胞凋亡率(Q2% + Q4%)。結(jié)果顯示為平均值±SD;所有實立進行三次。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。然后，我們用相同的方式處理 SHSY-5Y 細胞后檢測細胞中 GIGYF1 的 mR蛋白的表達水平。我們發(fā)現(xiàn)用 25mM 濃度葡萄糖處理 SHSY-5Y 細胞后，GIG表達水平明顯高于其他組(圖 3A, B)。為了進一步研究 GIGYF1 的功能，我們SY-5Y 細胞中用三種慢病毒以敲低了 GIGYF1 的表達。實時熒光定量 PCRestern blot 分析結(jié)果表明，GIGYF1-shRNA3 能夠有效抑制 SHSY-5Y 細胞GYF1 的表達，且最明顯(圖 3C, D)。所以，我們在接下來的研究中使用這個毒 shRNA 進行后續(xù)的實驗。


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