背景糖尿病患者有較高發(fā)生認(rèn)知功能障礙的風(fēng)險(xiǎn),即糖尿病腦病（DE）。DE在臨床上主要表現(xiàn)為慢性腦部疾病,比如認(rèn)知功能障礙、癡呆和精神障礙。Grb10（生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10）-相關(guān)的GYF蛋白1（GIGYF1）通過(guò)與銜接蛋白Grb10的連接可以調(diào)節(jié)胰島素生長(zhǎng)因子1受體（IGF1R）信號(hào)通路,而IGF1R信號(hào)通路在調(diào)節(jié)糖尿病相關(guān)的認(rèn)知功能障礙中扮演著重要的作用。目的初步探究GIGYF1的表達(dá)水平在高糖誘導(dǎo)的SHSY-5Y細(xì)胞中對(duì)IGF1R信號(hào)通路及對(duì)細(xì)胞功能的影響。方法用高糖誘導(dǎo)人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SHSY-5Y細(xì)胞,并用GIGYF1-shRNA慢病毒敲低GIGYF1的表達(dá)水平。用Western blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)SHSY-5Y細(xì)胞的GIGYF1、Grb10和IGF1R的蛋白和mRNA的表達(dá)水平。用Western blot方法檢測(cè)磷酸化IGF1R/IGF1R、磷酸化AKT/AKT和磷酸化ERK/ERK的蛋白表達(dá)水平。同時(shí),利用Annexin V/PI染色、EdU及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SHSY-5Y細(xì)胞的凋亡、增殖和遷移。結(jié)果SHSY-5Y細(xì)胞的凋亡隨著葡萄糖濃度（0-2... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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感染GIGYF1-shRNASHSY-5Y細(xì)胞的白光和熒光圖

圖 1 感染 GIGYF1-shRNA SHSY-5Y 細(xì)胞的白光和熒光圖Figure 1. White light and fluorescence of SHSY-5Y cells infected GIGYF1-shRNA virus.2 高糖誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并增加 GIGYF1 在 SHSY-5Y 細(xì)胞中的表達(dá)為了確定高糖對(duì) SHSY-5Y 細(xì)胞活力的影響，我們將血清饑餓 1 天的 SHSY胞用不同劑量的葡萄糖或甘露醇(0-200mm)處理 48h 后，用 Annexin VFITC 法細(xì)胞凋亡率，以 0mM 濃度的葡萄糖或甘露醇作為對(duì)照組。結(jié)果表明，隨著葡或甘露醇濃度的增加，細(xì)胞凋亡率呈上升趨勢(shì)。此外，甘露醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋度明顯低于高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡程度，且葡萄糖毒性高于甘露醇最為顯著時(shí)自的濃度為 50mM 時(shí)（圖 2A-C）。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 Annexin V-FITC/PI 染色檢測(cè) SHSY-5Y 細(xì)胞凋亡;(B)在血清饑餓的 SHSY-5Y 細(xì)胞中加濃度的葡萄糖(0-200mm)誘導(dǎo) 48h 后，檢測(cè) SHSY-5Y 細(xì)胞凋亡，方法與(A)相同;(C)分(A, B)中檢測(cè)到的 SHSY-5Y 細(xì)胞凋亡率(Q2% + Q4%)。結(jié)果顯示為平均值±SD;所有實(shí)立進(jìn)行三次。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。然后，我們用相同的方式處理 SHSY-5Y 細(xì)胞后檢測(cè)細(xì)胞中 GIGYF1 的 mR蛋白的表達(dá)水平。我們發(fā)現(xiàn)用 25mM 濃度葡萄糖處理 SHSY-5Y 細(xì)胞后，GIG表達(dá)水平明顯高于其他組(圖 3A, B)。為了進(jìn)一步研究 GIGYF1 的功能，我們SY-5Y 細(xì)胞中用三種慢病毒以敲低了 GIGYF1 的表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量 PCRestern blot 分析結(jié)果表明，GIGYF1-shRNA3 能夠有效抑制 SHSY-5Y 細(xì)胞GYF1 的表達(dá)，且最明顯(圖 3C, D)。所以，我們?cè)诮酉聛?lái)的研究中使用這個(gè)毒 shRNA 進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。


本文編號(hào)：3061664