目的:1、評價mi R-338-5p在膠質(zhì)瘤組織中的表達水平及其與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征之間的關(guān)系;2、探索mi R-338-5p在膠質(zhì)瘤細胞中的作用,尋找其作用靶基因,為膠質(zhì)瘤診斷和治療研究提供新靶點;3、引入噬菌體展示肽庫技術(shù),篩選和鑒定具有靶向能力的高親和特異性多肽;4、核素標(biāo)記、合成探針,與荷瘤鼠中評價中選小肽的腫瘤靶向性。材料與方法:運用q RT-PCR的方法檢測了膠質(zhì)瘤及其正常腦組織標(biāo)本中mi R-338-5p的表達;通過脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染法,將mi R-338-5p mimics導(dǎo)入膠質(zhì)瘤細胞T89G和U87中,提高內(nèi)源性mi R-338-5p的表達后,使用CCK-8細胞增殖實驗檢測mi R-338-5p對膠質(zhì)瘤細胞增殖能力的影響;利用生物信息學(xué)工具,預(yù)測了與mi R-338-5p作用的位點在CTBP2的3’UTR區(qū)域,利用熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實該結(jié)合位點。通過CCK8實驗和Transwell細胞侵襲實驗探索CTBP2是否是mi R-338-5p的直接作用靶基因。通過對比CTBP2特定序列尋找CTBP2特異性親和配體。獲得特定序列后,將其列為靶分子特異性結(jié)合的肽段,用于篩選... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

miRNA分子的生物合成示意圖

V 級別膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中 miRNA-338-5p 相對表達量為0.31±0.14。正常組織 miRNA-338-5p 表達量顯著高于膠質(zhì)瘤組織（p=0.01）。（圖2.1）我們將相對表達量大于等于 0.55 定義為高表達，將相對表達量低于 0.55 定義為低表達。并與膠質(zhì)瘤的各種臨床病理特征進行了相關(guān)性分析。我們發(fā)現(xiàn)，miRNA-338-5p 的相對表達量與膠質(zhì)瘤的 WHO 分級相關(guān)（p=0.006），與 Karnofsky表現(xiàn)值相關(guān)（p=0.007）。（表 2.1）圖 2.1 正常組織與膠質(zhì)瘤組織 miRNA-338-5p 相對表達量的比較

3.3 實驗結(jié)果3.3.1 m i R-338-5p 對膠質(zhì)瘤細胞增殖能力的影響生長情況膠質(zhì)瘤系T98G和U87中于6孔板中瞬時轉(zhuǎn)染miR-338-5p mimics和陰性對照24小時之后進行胰酶工作液消化處理（傳代），重新鋪種于96孔細胞培養(yǎng)板板中（1500個細胞/孔），置于細胞培養(yǎng)箱中，并分別在培養(yǎng)的第0小時、24小時、48小時、72小時和96小時加入CCK-8試劑（每孔10 μL），將培養(yǎng)細胞在細胞培養(yǎng)箱中充分孵育3小時后，采用分光光度計測定每個細胞培養(yǎng)孔的OD值。細胞培養(yǎng)的對照研究結(jié)果表明，膠質(zhì)瘤細胞轉(zhuǎn)染mimics上調(diào)miR-338-5p的表達水平后，與對照組相比，腫瘤細胞的生長趨勢明顯受到抑制（P<0.05，如圖3所示）。細胞克隆形成實驗示miR-338轉(zhuǎn)染入U87和T98G后的細胞增殖明顯減低（P<0.05，圖3.2 A-B）。


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