MiR-497調(diào)控Hif1α誘導(dǎo)EAE小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞生成炎性因子的機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間:2021-02-15 14:27
第一部分 EAE模型小鼠腦組織和體外用IL-17刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)下調(diào)的microRNA及其上調(diào)的Hif1α的表達(dá)分析目的:探討EAE模型小鼠的腦組織和體外用IL-17刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞后,其microRNA(miRNA)和轉(zhuǎn)錄因子,即缺氧誘導(dǎo)因子 1α(hypoxia inducible factor 1α,Hif1α)的表達(dá)變化。方法:用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)注射復(fù)制小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型并予鑒定,同時(shí)在體外培養(yǎng)和鑒定C57BL/6小鼠的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞;通過miRNA芯片篩查分析EAE模型小鼠發(fā)病14d、20d時(shí)腦組織中(體內(nèi))及用IL-17刺激小鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞(體外)后3h、6h,下調(diào)miRNA表達(dá)譜的變化,并找出體內(nèi)外共表達(dá)下調(diào)的miRNA;另在EAE小鼠建模后7d、14d、18d和20d和在IL-17刺激小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞后3h、6h、12h、24h和48h,行Western blot方法...
【文章來源】:南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】:106 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖2?MOG35_55抗原誘導(dǎo)不同時(shí)間EAE小鼠的神經(jīng)功能評(píng)分情況
MOG35_55抗原誘導(dǎo)后18?20d的發(fā)病高峰期,在EAE小鼠腦組織與脊髓組??織中有大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),尤其在小血管周圍呈現(xiàn)典型的“袖套”樣改變??(圖3B,D),但無論是在腦組織還是脊髓組織,PBS對(duì)照組均未見病理??學(xué)的異常改變。提示,小鼠EAE模型復(fù)制成功。??A?B?\?yl??廣??.?了二?,.,.?入-,????圖3光鏡觀察EAE小鼠的病理學(xué)改變(HE染色,A、C、Dx200;?Bx400)?A.??PBS對(duì)照小鼠腦組織;B.?EAE小鼠腦組織;C.?PBS對(duì)照小鼠的脊髓組織;D.?EAE??小鼠的脊髓組織。??20??
為了進(jìn)一步確定EAE小鼠髓鞘損傷的情況,我們通過電鏡觀察了髓鞘??的超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果顯示,PBS對(duì)照組的髓鞘致密、均一;而EAE組小??鼠的髓鞘明顯損傷,呈現(xiàn)松散、斷裂的病理學(xué)改變(圖4)。??mm??圖4?EAE小鼠髓鞘超微結(jié)構(gòu)的改變(A.?PBS組;B.?EAE組)。電鏡下觀察小??鼠髓鞘超微結(jié)構(gòu)的改變顯示,EAE組小鼠的髓鞘呈現(xiàn)松散、斷裂。??二、小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)與鑒定??星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)體外傳代培養(yǎng)后,置于倒置顯微鏡下觀察,其胞漿豐??富且核漿較少,形狀多不規(guī)則,胞體分支多,胞核為橢圓形,常常偏于胞??體一側(cè)。用兔抗GFAP多克隆抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色及免疫熒光染色??鑒定,可見培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的表達(dá)定位于胞漿。按照陽性細(xì)胞??率(陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù))xl〇〇%,每張切片統(tǒng)計(jì)5個(gè)視野,分別計(jì)數(shù)陽??性細(xì)胞的個(gè)數(shù)和細(xì)胞總數(shù),計(jì)算出GFAP陽性率可達(dá)90%以上(圖5)。???系.??21??
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]表達(dá)馬傳染性貧血病毒受體和熒光素酶報(bào)告基因的293細(xì)胞系的建立[J]. 王登峰,張淑琴,馬學(xué)恩,簡(jiǎn)子建,周建華,郭巍,全滟平. 微生物學(xué)報(bào). 2007(06)
[2]A novel heterodimeric cytokine consisting of IL-17 and IL-17F regulates inflammatory responses[J]. Seon Hee Chang. Cell Research. 2007(05)
[3]低氧預(yù)適應(yīng)對(duì)小鼠海馬組織HIF-1與EPO低氧應(yīng)答元件結(jié)合活性的影響[J]. 邵國(guó),周衛(wèi)華,高翠英,張然,呂國(guó)蔚. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2007(01)
[4]缺氧誘導(dǎo)因子1α上調(diào)缺氧大鼠肺動(dòng)脈誘導(dǎo)型一氧化氮合酶基因的表達(dá)(英文)[J]. 胡瑞成,戴愛國(guó),譚雙香. Chinese Medical Journal. 2002(12)
本文編號(hào):3035007
【文章來源】:南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】:106 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖2?MOG35_55抗原誘導(dǎo)不同時(shí)間EAE小鼠的神經(jīng)功能評(píng)分情況
MOG35_55抗原誘導(dǎo)后18?20d的發(fā)病高峰期,在EAE小鼠腦組織與脊髓組??織中有大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),尤其在小血管周圍呈現(xiàn)典型的“袖套”樣改變??(圖3B,D),但無論是在腦組織還是脊髓組織,PBS對(duì)照組均未見病理??學(xué)的異常改變。提示,小鼠EAE模型復(fù)制成功。??A?B?\?yl??廣??.?了二?,.,.?入-,????圖3光鏡觀察EAE小鼠的病理學(xué)改變(HE染色,A、C、Dx200;?Bx400)?A.??PBS對(duì)照小鼠腦組織;B.?EAE小鼠腦組織;C.?PBS對(duì)照小鼠的脊髓組織;D.?EAE??小鼠的脊髓組織。??20??
為了進(jìn)一步確定EAE小鼠髓鞘損傷的情況,我們通過電鏡觀察了髓鞘??的超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果顯示,PBS對(duì)照組的髓鞘致密、均一;而EAE組小??鼠的髓鞘明顯損傷,呈現(xiàn)松散、斷裂的病理學(xué)改變(圖4)。??mm??圖4?EAE小鼠髓鞘超微結(jié)構(gòu)的改變(A.?PBS組;B.?EAE組)。電鏡下觀察小??鼠髓鞘超微結(jié)構(gòu)的改變顯示,EAE組小鼠的髓鞘呈現(xiàn)松散、斷裂。??二、小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)與鑒定??星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)體外傳代培養(yǎng)后,置于倒置顯微鏡下觀察,其胞漿豐??富且核漿較少,形狀多不規(guī)則,胞體分支多,胞核為橢圓形,常常偏于胞??體一側(cè)。用兔抗GFAP多克隆抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色及免疫熒光染色??鑒定,可見培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的表達(dá)定位于胞漿。按照陽性細(xì)胞??率(陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù))xl〇〇%,每張切片統(tǒng)計(jì)5個(gè)視野,分別計(jì)數(shù)陽??性細(xì)胞的個(gè)數(shù)和細(xì)胞總數(shù),計(jì)算出GFAP陽性率可達(dá)90%以上(圖5)。???系.??21??
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]表達(dá)馬傳染性貧血病毒受體和熒光素酶報(bào)告基因的293細(xì)胞系的建立[J]. 王登峰,張淑琴,馬學(xué)恩,簡(jiǎn)子建,周建華,郭巍,全滟平. 微生物學(xué)報(bào). 2007(06)
[2]A novel heterodimeric cytokine consisting of IL-17 and IL-17F regulates inflammatory responses[J]. Seon Hee Chang. Cell Research. 2007(05)
[3]低氧預(yù)適應(yīng)對(duì)小鼠海馬組織HIF-1與EPO低氧應(yīng)答元件結(jié)合活性的影響[J]. 邵國(guó),周衛(wèi)華,高翠英,張然,呂國(guó)蔚. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2007(01)
[4]缺氧誘導(dǎo)因子1α上調(diào)缺氧大鼠肺動(dòng)脈誘導(dǎo)型一氧化氮合酶基因的表達(dá)(英文)[J]. 胡瑞成,戴愛國(guó),譚雙香. Chinese Medical Journal. 2002(12)
本文編號(hào):3035007
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