第一部分 EAE模型小鼠腦組織和體外用IL-17刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)下調(diào)的microRNA及其上調(diào)的Hif1α的表達(dá)分析目的:探討EAE模型小鼠的腦組織和體外用IL-17刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞后,其microRNA（miRNA）和轉(zhuǎn)錄因子,即缺氧誘導(dǎo)因子 1α（hypoxia inducible factor 1α,Hif1α）的表達(dá)變化。方法:用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG）注射復(fù)制小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型并予鑒定,同時(shí)在體外培養(yǎng)和鑒定C57BL/6小鼠的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞;通過miRNA芯片篩查分析EAE模型小鼠發(fā)病14d、20d時(shí)腦組織中（體內(nèi)）及用IL-17刺激小鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞（體外）后3h、6h,下調(diào)miRNA表達(dá)譜的變化,并找出體內(nèi)外共表達(dá)下調(diào)的miRNA;另在EAE小鼠建模后7d、14d、18d和20d和在IL-17刺激小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞后3h、6h、12h、24h和48h,行Western blot方法... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＭＯＧ３５＿５５抗原誘導(dǎo)不同時(shí)間ＥＡＥ小鼠的神經(jīng)功能評(píng)分情況

ＭＯＧ３５＿５５抗原誘導(dǎo)后１８？２０ｄ的發(fā)病高峰期，在ＥＡＥ小鼠腦組織與脊髓組??織中有大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，尤其在小血管周圍呈現(xiàn)典型的“袖套”樣改變??（圖３Ｂ，Ｄ），但無論是在腦組織還是脊髓組織，ＰＢＳ對(duì)照組均未見病理??學(xué)的異常改變。提示，小鼠ＥＡＥ模型復(fù)制成功。??Ａ?Ｂ?＼?ｙｌ??廣？?．?了二?，．，．?入－，?？??圖３光鏡觀察ＥＡＥ小鼠的病理學(xué)改變（ＨＥ染色，Ａ、Ｃ、Ｄｘ２００；?Ｂｘ４００）?Ａ．??ＰＢＳ對(duì)照小鼠腦組織；Ｂ．?ＥＡＥ小鼠腦組織；Ｃ．?ＰＢＳ對(duì)照小鼠的脊髓組織；Ｄ．?ＥＡＥ??小鼠的脊髓組織。??２０??

為了進(jìn)一步確定ＥＡＥ小鼠髓鞘損傷的情況，我們通過電鏡觀察了髓鞘??的超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果顯示，ＰＢＳ對(duì)照組的髓鞘致密、均一；而ＥＡＥ組小??鼠的髓鞘明顯損傷，呈現(xiàn)松散、斷裂的病理學(xué)改變（圖４）。??ｍｍ??圖４?ＥＡＥ小鼠髓鞘超微結(jié)構(gòu)的改變（Ａ．?ＰＢＳ組；Ｂ．?ＥＡＥ組）。電鏡下觀察小??鼠髓鞘超微結(jié)構(gòu)的改變顯示，ＥＡＥ組小鼠的髓鞘呈現(xiàn)松散、斷裂。??二、小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)與鑒定??星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)體外傳代培養(yǎng)后，置于倒置顯微鏡下觀察，其胞漿豐??富且核漿較少，形狀多不規(guī)則，胞體分支多，胞核為橢圓形，常常偏于胞??體一側(cè)。用兔抗ＧＦＡＰ多克隆抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色及免疫熒光染色??鑒定，可見培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞ＧＦＡＰ的表達(dá)定位于胞漿。按照陽性細(xì)胞??率（陽性細(xì)胞數(shù)／總細(xì)胞數(shù)）ｘｌ〇〇％，每張切片統(tǒng)計(jì)５個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)陽??性細(xì)胞的個(gè)數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，計(jì)算出ＧＦＡＰ陽性率可達(dá)９０％以上（圖５）。??？系．??２１??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3035007