目的:腦膠質(zhì)瘤（Glioma）是成人最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。盡管目前常規(guī)綜合治療（手術(shù)、放療、化療）的方法在不斷改善,但療效仍未得到顯著提高。目前研究證實(shí),在腦膠質(zhì)瘤中存在一些膠質(zhì)瘤干細(xì)胞。它是一種具有無(wú)限增殖、自我更新、多向分化等干細(xì)胞特性的腫瘤原始細(xì)胞,它可能是誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤發(fā)生、復(fù)發(fā),導(dǎo)致預(yù)后較差的原因,因此靶向治療膠質(zhì)瘤干細(xì)胞將成為研究腦膠質(zhì)瘤的一大熱點(diǎn)。在腦膠質(zhì)瘤中,作為一條高度保守的信號(hào)通路,Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是通過(guò)調(diào)控胚胎生長(zhǎng)、發(fā)育、能量代謝和干細(xì)胞維持等多種生物學(xué)過(guò)程,在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)生和形態(tài)發(fā)育中起重要作用。近年有研究表明FRAT1作為Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的重要成員,在多種惡性腫瘤包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤中過(guò)度表達(dá),并且在神經(jīng)干細(xì)胞增殖過(guò)程中有重要的調(diào)控作用。但目前國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道關(guān)于該基因與膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的相關(guān)性研究。本論文旨在研究FRAT1對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞體外、體內(nèi)增殖能力的影響以及探討其作用機(jī)制。方法:通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)敲低FRAT1的表達(dá),構(gòu)建出低表達(dá)FRAT1的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞模型。采用細(xì)胞增殖CCK-8實(shí)驗(yàn),研究FRAT1低表達(dá)對(duì)膠... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

免疫熒光染色觀察CD133、Nestin在

圖 2 免疫熒光雙染法觀察 FRAT1 與 CD133 在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中的共表達(dá)（×400）。光顯微鏡下觀察 CD133 和 FRAT1 在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 U251 的胞質(zhì)胞漿中染色陽(yáng)性，在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中 FRAT1 與 CD133 有共定位現(xiàn)象。2.3 FRAT1 的低表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的體外增殖能力CCK-8 檢測(cè)結(jié)果顯示：隨著培養(yǎng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞時(shí)間的延長(zhǎng)，全自動(dòng)酶標(biāo)儀上A450 OD 值不斷升高，進(jìn)而說(shuō)明膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的數(shù)目隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)不斷增加。統(tǒng)計(jì)分析顯示，A 組的 OD 值明顯低于 B 組（P=0.036）和 C 組（P=0.030），而 B 組和 C 組 OD 值的差異無(wú)意義（P=0.934）。并根據(jù) 1，2，3，4，5，6 天酶標(biāo)儀的 A450 OD 值繪制 A、B 和 C 三組的生長(zhǎng)情況（如表 1，圖 3 所示）。A450 OD值差異最大出現(xiàn)在第 6 天，A450 OD 值在 A、B、C 三組分別是：1.4029±0.0861，2.4371±0.0456，2.645±0.0563。CCK-8 體外增殖實(shí)驗(yàn)證實(shí)低表達(dá)的 FRAT1 能夠顯著

圖 3 CCK-8 檢測(cè) A，B，C 組 1-6 天的生長(zhǎng)情況圖 3 CCK8 實(shí)驗(yàn)證明膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中低表達(dá) FRAT1 對(duì)其體外增殖能力的影響。連續(xù)觀察 1-6 天，可見(jiàn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 A 組的 A450 OD 值顯著低于 B、C 組，P<（A 組為敲低 FRAT1 組，B 組為無(wú)關(guān)序列組，C 組為正常細(xì)胞組）。2.4 FRAT1 的低表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的體內(nèi)增殖能力（1）荷瘤鼠模型建立后，用小動(dòng)物磁共振分別觀察三組荷瘤鼠于 0 天，7 天14 天，21 天時(shí)顱內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)情況，并測(cè)算出每次顱內(nèi)腫瘤體積大小。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，三組荷瘤鼠顱內(nèi)腫瘤體積也是不斷增大。腫瘤差異最大出現(xiàn)在天時(shí)（如表 2，圖 4，圖 5 所示），A、B、C 三組腫瘤體積分別是：1.3877±0.05.7853±0.7501，6.2033±0.897。A 組的腫瘤體積明顯低于 B 組（P=0.045）和 C （P=0.034），，而 B 組和 C 組腫瘤體積差異無(wú)意義（P=0.841）。表 2 MRI 檢測(cè) A，B，C 組在 7，14，21 天的顱內(nèi)腫瘤體積大�。╩m2）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與腦膠質(zhì)瘤[J]. 陳夢(mèng)娜,劉婷,郭庚.  國(guó)際腫瘤學(xué)雜志. 2013 (09)



本文編號(hào)：3018656