本文關(guān)鍵詞：芬戈莫德（FTY720）對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠細(xì)胞因子表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)白質(zhì)的脫髓鞘病變作為特點(diǎn),遺傳易感個(gè)體與環(huán)境因素共同作用發(fā)生的自身免疫性疾病。其病因和機(jī)制尚未完全明確,但目前發(fā)現(xiàn)一些炎性細(xì)胞因子是導(dǎo)致其發(fā)生的主要原因。各種細(xì)胞因子以自分泌或者旁分泌的形式,參與該疾病免疫反應(yīng)和組織修復(fù)過程,并且對(duì)多發(fā)性硬化病情的嚴(yán)重程度和發(fā)展起決定性作用。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是一種以特異性致敏的CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)為主,以中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)小血管周圍出現(xiàn)的單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)及髓鞘脫失為特征的自身免疫性疾病,是人類多發(fā)性硬化(MS)病研究的理想動(dòng)物模型,對(duì)研究臨床神經(jīng)免疫學(xué)具有重要意義。芬戈莫德(fingolimod,FTY720)是從冬蟲夏草中提取的有效成分-多球殼菌素(myriocin,ISP-1)通過去除手性中心、改變側(cè)鏈等處理而合成的新型免疫抑制劑。FTY720的免疫抑制主要通過激動(dòng)鞘氨醇-1-磷酸鹽(sphingosine-1-phosphate,S1P)受體起作用,在體內(nèi)主要經(jīng)鞘氨醇激酶2的作用轉(zhuǎn)化成單磷酸酯化合物(FTY720-P)進(jìn)而發(fā)揮作用。并且,不同于其他用于治療MS的藥劑,FTY720獨(dú)有的親脂特性可以使它輕松的進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)以芬戈莫德作為干預(yù)藥物,觀察EAE小鼠及應(yīng)用芬戈莫德治療后小鼠的發(fā)病率、發(fā)病的嚴(yán)重程度以及芬戈莫德對(duì)其病程的影響。研究芬戈莫德對(duì)EAE小鼠表達(dá)促炎或抑炎細(xì)胞因子IL-17、TGF-β、RORγt、FOXP3的影響以及FTY720是否可以減輕EAE小鼠脊髓組織中的炎性浸潤(rùn)程度,進(jìn)而研究芬戈莫德是否對(duì)EAE起保護(hù)作用。方法:將60只周齡在8至10周,體重為18g至20g的雌性C57BL/6小鼠,隨機(jī)分成control組、EAE組和FTY720組,各組分別為20只。以為抗原建立EAE動(dòng)物模型。FTY720組小鼠自EAE免疫當(dāng)天起,給予FTY720 0.3mg/kg每日灌胃;control組及EAE組小鼠自EAE免疫當(dāng)天起,給予等量的生理鹽水每日灌胃。從免疫第1天開始,采用雙盲法每日早晚(8:00和16:00)兩次由兩名觀察者分別對(duì)小鼠進(jìn)行稱重、神經(jīng)功能評(píng)分(采用weaver 15分法)直至處死。于免疫后第20天,相當(dāng)于小鼠發(fā)病高峰期,處死小鼠。從control組、EAE組、FTY720組分別取15只小鼠,斷頸處死,在冰盤上迅速取出腦、脊髓,液氮速凍后,置于-80℃冰箱保存,利用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)脊髓中IL-17、TGF-β、RORγt、FOXP3表達(dá)水平。從control組、EAE組、FTY720組分別取5只小鼠用4%多聚甲醛灌注固定后取脊髓腰膨脹大部分,經(jīng)固定、沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、粘片等過程后制成石蠟切片,進(jìn)行HE染色觀察炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示(x±s),多組計(jì)量資料均數(shù)的比較應(yīng)用ANOVA方差分析,P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)量資料均數(shù)的組間比較應(yīng)用snk-q檢驗(yàn),P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。發(fā)病率以百分?jǐn)?shù)表示,各組間發(fā)病率的比較采用卡方檢測(cè),P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 FTY720組發(fā)病率較EAE組顯著降低(P0.05)。2 在發(fā)病第20天,FTY720組平均神經(jīng)功能評(píng)分均較EAE組顯著降低去(P0.05)。3 各組小鼠脊髓組織中IL-17、TGF-β、RORγt、FOXP3表達(dá)水平:在發(fā)病20天時(shí),與Control組相比,EAE組IL-17、RORγt水平均增高,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與EAE組相比,FTY720組IL-17、RORγt水平均降低,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。在發(fā)病20天時(shí),與Control組相比,EAE組TGF-β、FOXP3水平均降低,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與EAE組相比,FTY720組TGF-β、FOXP3水平均增高,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4 HE染色:在發(fā)病20天時(shí),與Control組相比,EAE組和FTY720組小鼠脊髓組織中的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)明顯增多,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與EAE組相比,FTY720組小鼠脊髓組織中的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)明顯減少,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1 FTY720可以降低EAE小鼠發(fā)病率,延遲EAE小鼠發(fā)病的起始時(shí)間,減輕神經(jīng)功能損傷的嚴(yán)重程度,促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù),對(duì)EAE小鼠具有保護(hù)作用。2 FTY720可以增高EAE小鼠脊髓組織中抗炎細(xì)胞因子TGF-β、FOXP3的表達(dá)水平,并降低EAE小鼠脊髓組織中促炎細(xì)胞因子IL-17、RORγt的表達(dá)水平。3 FTY720可以減輕EAE小鼠脊髓組織中的炎性浸潤(rùn),減輕了EAE小鼠炎癥反應(yīng)程度。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性硬化 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 芬戈莫德 IL-17 TGF-β RORγt FOXP3
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R744.51
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-26
• 附表26-27
• 討論27-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述 芬戈莫德對(duì)EAE治療的作用機(jī)制及EAE相關(guān)細(xì)胞因子免疫學(xué)機(jī)制36-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 致謝49-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷50

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭敏芳;紀(jì)寧;馬存根;;多發(fā)性硬化的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2008年06期

  本文關(guān)鍵詞：芬戈莫德（FTY720）對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠細(xì)胞因子表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：299458