背景:伴皮質(zhì)下梗死和白質(zhì)腦病的常染色體隱性遺傳性腦動(dòng)脈病（cerebral autosomal recessive arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CARASIL）是一種罕見(jiàn)的遺傳性腦小血管病,由HTRA1基因純合或復(fù)合雜合突變導(dǎo)致,呈常染色體隱性遺傳。然而,最近的研究發(fā)現(xiàn)雜合HTRA1突變也會(huì)引起腦小血管病（CSVD）,并且呈常染色體顯性遺傳。目的:篩查中國(guó)CSVD患者的基因突變,重點(diǎn)探討雜合HTRA1突變患者的基因突變譜及臨床表型。方法:選擇2015年3月至2019年7月收治的95例具有典型CSVD特征的患者,收集其相關(guān)臨床資料、影像學(xué)資料和神經(jīng)心理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果,并應(yīng)用全外顯子測(cè)序技術(shù)（whole exome sequencing,WES）結(jié)合Sanger測(cè)序進(jìn)行基因檢測(cè),用致病性預(yù)測(cè)軟件對(duì)篩查到的變異進(jìn)行致病性評(píng)估。分析并總結(jié)雜合HTRA1突變患者的基因突變譜及臨床表型。結(jié)果:我們?cè)?5例CSVD先證者中檢測(cè)出5個(gè)雜合HTRA1突變,且Sanger測(cè)序及家系共分離驗(yàn)證成功,其中3個(gè)是已知突... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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雜合HTRA1致病變異相關(guān)CSVD患者基因突變檢測(cè)流程圖

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文正文研究?jī)?nèi)容和方法9圖2全外顯子測(cè)序技術(shù)流程(引自祥音生物官網(wǎng)www.xiangyin.org.cn/)③變異位點(diǎn)篩選：去除變異頻率在gnomAD、ExAc和1000Genomes數(shù)據(jù)庫(kù)中大于0.05的變異位點(diǎn)，去除位于內(nèi)含子等非編碼區(qū)的全部變異及編碼區(qū)的同義突變，保留下的變異位點(diǎn)根據(jù)其遺傳模式、基因型-表型關(guān)系是否符合，再經(jīng)PolyPhen2、SIFT、MutaionTaster、CADD和M-CAP等軟件預(yù)測(cè)分析篩選，找到符合被檢者表型的致病基因突變位點(diǎn)的初步數(shù)據(jù)。最后，根據(jù)ACMG指南，結(jié)合一代驗(yàn)證、家系共分離結(jié)果與Intervar自動(dòng)判讀證據(jù)，可將變異位點(diǎn)的性質(zhì)劃分為：致并可能致并良性、可能良性和不能確定[29-31]。

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文正文研究?jī)?nèi)容和方法11后分管備用。3、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增目的序列使用2×TaqMix試劑盒(KT201，天根)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，具體步驟按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，PCR反應(yīng)體系參見(jiàn)表3，PCR反應(yīng)條件參見(jiàn)圖3。表350μL反應(yīng)體系成分名稱(chēng)濃度體積正向引物（Forward）10pmol/μL0.5μL反向引物（Reward）10pmol/μL0.5μL滅菌蒸餾水3μL模板DNA100ng/μL1μL2×TaqMix5μL總體積10μL圖3PCR反應(yīng)條件4、PCR產(chǎn)物檢測(cè)操作步驟如上述DNA檢測(cè)部分，配置1%的瓊脂糖凝膠，電泳緩沖液為1×TAE，分別取5μLPCR產(chǎn)物加入1μL6×loadingbuffer充分混勻，逐孔上樣，電泳時(shí)使用DNAmarkerD2000作為參照。


本文編號(hào)：2987856